Abbexa/艾美捷人Asprosin ELISA試劑盒，體外定量測(cè)定

Asprosin 是哺乳動(dòng)物在其脂肪（白色脂肪）組織中產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)激素，可刺激肝臟 將葡萄糖釋放到血液中。在這些組織中，asprosin 由基因 FBN1 編碼，該基因也編碼蛋白質(zhì) 原纖維蛋白。在肝臟中，asprosin 通過(guò)環(huán)磷酸腺苷 （cAMP） 依賴性途徑激活快速葡萄糖釋放。 Asprosin 最初由 Batul Chopra 博士和貝勒醫(yī)學(xué)院的同事鑒定為 C 端切割產(chǎn)物 FBN1基因產(chǎn)物profibrillin。他們?cè)趦擅忍煨圆糠种緺I(yíng)養(yǎng)不良患者中發(fā)現(xiàn)了FBN1基因突變，并且 早衰樣外觀。這兩名患者是Lizzie Velasquez和Abby Solomon。這些患者中 FBN1 蛋白的截?cái)?被認(rèn)為對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生有兩個(gè)后果：突變/截短的原纖維蛋白和非常低的血漿 asprosin 水平 （來(lái)自假設(shè)的顯性負(fù)面影響）。此后，這種情況被命名為馬方樣-早衰-脂肪營(yíng)養(yǎng)不良綜合征。

Abbexa/艾美捷人Asprosin ELISA Kit是一種ELISA試劑盒，用于體外定量測(cè)定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、細(xì)胞裂解物和其他生物體液中人Asprosin的濃度。低水平的阿斯普羅辛可用于指示馬凡脂肪營(yíng)養(yǎng)不良綜合征，高水平的阿斯普羅辛可以在肥胖患者中發(fā)現(xiàn)。

Abbexa人Asprosin ELISA試劑盒檢測(cè)原理：

該試劑盒基于夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)。將抗體預(yù)包被到 96 孔板上。將標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣品和生物素偶聯(lián)試劑加入孔中并孵育。然后加入HRP偶聯(lián)試劑，孵育整個(gè)板。在每個(gè)階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的偶聯(lián)物。TMB 底物用于定量 HRP 酶促反應(yīng)。加入TMB底物后，只有含有足夠FBN1的孔才會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，然后在加入酸性終止溶液后變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與板上結(jié)合的 FBN1 量成正比。在酶標(biāo)儀中以450nm處的分光光度法測(cè)量光密度（OD），從中可以計(jì)算FBN1的濃度。

試劑制備：

此過(guò)程僅供參考。產(chǎn)品手冊(cè)可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨附的產(chǎn)品手冊(cè)上的規(guī)定使用，并與產(chǎn)品一起交付。

1）標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后按照實(shí)驗(yàn)方案中的說(shuō)明，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行連續(xù)稀釋。

2） 洗滌緩沖液：按照實(shí)驗(yàn)方案中的說(shuō)明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3）檢測(cè)試劑制備：計(jì)算所需工作液的總體積。稀釋檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B 分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1：100 的比例稀釋。

檢測(cè)程序：

此過(guò)程僅供參考。產(chǎn)品手冊(cè)可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨附的產(chǎn)品手冊(cè)上的規(guī)定使用，并與產(chǎn)品一起交付。

1）制定標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)試樣品和控制井。

2） 將 100 μl 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中。

3） 將 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液分裝到對(duì)照（零）孔中。

4） 將 100 μl 稀釋的樣品分裝到樣品孔中。在37°C孵育1小時(shí)。

5） 將 100 μl 檢測(cè)試劑 A 分裝到每個(gè)孔中。在37°C孵育1小時(shí)。

6）洗滌3次。

7） 將 100 μl 檢測(cè)試劑 B 分裝到每個(gè)孔中。在37°C孵育30分鐘。

8）洗滌5次。

9） 將 90 μl TMB 底物分裝到每個(gè)孔中。在37°C孵育10-20分鐘。

10） 分裝 50 μl 終止液。

11） 在 450 nm 處測(cè)量外徑。

協(xié)議：

此過(guò)程僅供參考。產(chǎn)品手冊(cè)可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨附的產(chǎn)品手冊(cè)上的規(guī)定使用，并與產(chǎn)品一起交付。

使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫（18 - 25°C）。建議為每個(gè)測(cè)試?yán)L制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和對(duì)照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議至少測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品一式兩份。

2. 將 100 μL 每種標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品加入適當(dāng)?shù)目字?。用蓋子密封板，在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

3. 取下蓋子，丟棄液體。

4. 向每個(gè)孔中加入 100 μl 檢測(cè)試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板，在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 3 次。

6. 向每個(gè)孔中加入 100 μL 檢測(cè)試劑 B 工作液，密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘。

7. 棄去溶液，按照上一步所述用洗滌緩沖液洗滌板 5 次。

8. 將 90 μl TMB 底物分裝到每個(gè)孔中。用蓋子密封板，在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時(shí)間僅供參考，最佳時(shí)間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過(guò) 30 分鐘。

9. 向每個(gè)孔中加入 50 μL 終止液。立即以 450 nm 讀取。

結(jié)果計(jì)算：

計(jì)算時(shí)，對(duì)每個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)和每個(gè)樣品的 O.D.450 重復(fù)讀數(shù)求平均值，然后減去平均對(duì)照（零）O.D.450 讀數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以繪制為每種參比標(biāo)準(zhǔn)溶液[Y]的相對(duì)外徑450與每種標(biāo)準(zhǔn)溶液（X）的相應(yīng)濃度的關(guān)系。樣品的Asprosin濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值。

檢測(cè)精密度：

測(cè)定內(nèi)精密度（測(cè)定內(nèi)精密度）：在一個(gè)平板上分別測(cè)試3個(gè)低、中、高水平Asprosin樣品20次。

批間精密度（測(cè)定間精密度）：在 3 個(gè)不同的平板上測(cè)試 3 個(gè)含有低、中、高水平 Asprosin 的樣品，每個(gè)平板重復(fù) 8 次。

CV （%） =（標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值） × 100 批內(nèi)：CV<10%批間：CV<12%

僅供研究使用。 范圍和靈敏度可能會(huì)發(fā)生變化。

作為在中國(guó)的區(qū)域Abbexa代理，艾美捷將為中國(guó)客戶提供全面的Abbexa產(chǎn)品以及客戶訂制化服務(wù)。