HybriDetect 2T試紙條（MGDS2A）測定性能&結(jié)果解讀

HybriDetect通常用于DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的快速檢測。許多客戶會使用帶有Biotin、FITC/FAM修飾的引物，反應(yīng)產(chǎn)物包含這些標(biāo)簽，從而可以在HybriDetect試紙條上被檢測到。如PCR和多種等溫擴(kuò)增技術(shù)(如LAMP-LFA)均可以和HybriDetect一起應(yīng)用。此外，由于標(biāo)記探針的特異性雜交，這種方法允許大量核酸(如核糖體RNA)的直接檢測（無需擴(kuò)增）。

艾美捷通用側(cè)流式試紙條：HybriDetect 2T試紙條（MGDS2A）：用于同時檢測用FITC、生物素和地-高-辛標(biāo)記的兩種不同分析物（蛋白質(zhì)、基因組擴(kuò)增產(chǎn)物）的通用側(cè)流式試紙條。REF: MGHD 2 1；規(guī)格：100 Texts

方法：

Milenia HybriDetect 2T是一種即用型通用試紙條（浸漬棒），基于使用金顆粒的側(cè)流技術(shù)。該試紙條旨在開發(fā)用于同時檢測兩種不同分析物（如蛋白質(zhì)、抗體或基因擴(kuò)增）的定性或定量快速測試系統(tǒng)。用戶需要開發(fā)兩種特異性分析物溶液。溶液A：含有用FITC標(biāo)記的第一探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用生物素標(biāo)記的第二探針（例如抗體、引物）。溶液B：同樣含有用FITC標(biāo)記的第一探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用地-高-辛標(biāo)記的第二探針（例如抗體、引物）

待測樣品與開發(fā)的分析物特異性溶液混合后，將試紙條放入該溶液中。

用FITC和生物素標(biāo)記的分析物A復(fù)合物首先與試紙條的樣品施加區(qū)域中標(biāo)記有金的FITC特異性抗體結(jié)合。用FITC和地-高-辛標(biāo)記的分析物B復(fù)合物也與試紙條的該區(qū)域結(jié)合。毛細(xì)力使金復(fù)合物A和B擴(kuò)散到分析膜上。只有被捕獲的金顆粒分析物在溢出相應(yīng)測試帶（測試帶A-分析物A，測試帶B-分析物B）時，與固定的生物素配體分子結(jié)合，并隨時間生成紅藍(lán)色帶狀。未被捕獲的金顆粒流過控制帶，并被物種特異性抗體固定在那里。隨著孵育時間的增加，會形成一個顏色濃烈的控制帶。

PCR產(chǎn)物測定性能：

1. 從容器中取出所需數(shù)量的試紙條并標(biāo)記它們。

2. 對于每個待分析的樣品，將100 uL HybriDetect測定緩沖液或個別開發(fā)的緩沖液移液到反應(yīng)管或微孔板的孔中。

3. 直接將5-10 uL的雜交產(chǎn)物移液到樣品施加區(qū)域，或者選擇將5-10 uL的雜交產(chǎn)物加入反應(yīng)管/孔中的溶液中。

4. 將試紙條的樣品施加區(qū)域放入溶液中，并以直立的姿勢孵育，例如5-15分鐘。

5. 孵育結(jié)束后，將試紙條從測定溶液中取出，并立即解讀測試結(jié)果。

注意：

如果需要更高的分析靈敏度，增加PCR產(chǎn)物的體積可能會有所幫助。體積、特定于分析物的溶液和孵育時間始終是個別測試開發(fā)的一部分。

測定性能 "RPA產(chǎn)物"

1. 從容器中取出所需數(shù)量的試紙條并標(biāo)記它們。

2. 對于每個待分析的樣品，將80 uL HybriDetect測定緩沖液（MGCBB）移液至反應(yīng)管或微孔板的孔中。

3. 在RPA反應(yīng)后，用HybriDetect測定緩沖液（MGCBB）稀釋RPA反應(yīng)混合物1/50或1/25（用于更高的靈敏度），并直接加載10 ul至樣品施加區(qū)域。

4. 將已加載的試紙條的樣品施加區(qū)域放入準(zhǔn)備好的溶液中（參見第2點），并以直立姿勢孵育，例如5-15分鐘。

孵育結(jié)束后，將試紙條從測定溶液中取出，并解讀測試結(jié)果。

結(jié)果解讀

應(yīng)用內(nèi)部PCR控制：

雖然生物素標(biāo)記的擴(kuò)增物A主要用于檢測特定目標(biāo)序列，但地-高-辛標(biāo)記的擴(kuò)增物B被提供作為內(nèi)部PCR擴(kuò)增控制。

PCR測定的靈敏度：

Milenia HybriDetect 2T的分析靈敏度相當(dāng)于瓊脂糖凝膠電泳和隨后用溴化乙錠染色。不受PCR產(chǎn)物大小和擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的影響，可以檢測到低至5 pg的DNA。

警告和注意事項：

1.所有試劑應(yīng)在原始容器中存放在 2-8 ℃的環(huán)境中。

2.使用前，將所有試劑恢復(fù)至室溫（18-28 ℃）。

3.必須遵守所有組分的有效期限。

4.保護(hù)檢測條免受濕氣影響；容器必須始終密封。

5.只接觸和標(biāo)記檢測條的箔紙覆蓋區(qū)域（標(biāo)記區(qū)域）。

6.廢棄物的處理必須按照當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)進(jìn)行。

7.檢測緩沖液含有抗微生物試劑，因此避免與皮膚和/或黏膜接觸。

8.適用于專業(yè)用戶。