鼠尾膠原蛋白溶液，I型在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

用于 3D 凝膠的 RatCol 是 25 mL 的 4 mg/ml I 型鼠尾端膠原溶液，用于 2D 涂層或 3D 水凝膠。該 3D 凝膠套件配有中和溶液，易于操作。作為端膠原蛋白，用于 3D 凝膠的 RatCol 將形成比端膠原蛋白更堅(jiān)固的水凝膠。 RatCol I 型酸溶性鼠尾膠原蛋白在 0.02M 乙酸溶液（~pH 3）中含有 100 mg，濃度約為 4 mg/mL。 RatCol 膠原蛋白是可溶性端膠原蛋白。每個(gè)產(chǎn)品包括一瓶含有 100 毫克膠原蛋白溶液的瓶子，以及一瓶用于形成膠原蛋白凝膠的預(yù)先配制的中和溶液。該產(chǎn)品經(jīng)過無(wú)菌過濾。

艾美捷鼠尾膠原蛋白溶液，I 型，4 mg/ml，25 mL（3D 水凝膠）+ 中和溶液（ABM-5153-1KIT）非常適合表面涂層、為培養(yǎng)細(xì)胞提供薄層的制備或用作固體凝膠。 RatCol 膠原蛋白適用于使用多種細(xì)胞系的應(yīng)用，包括肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞。

鼠尾膠原蛋白溶液，I 型，4 mg/ml，25 mL（3D 水凝膠）+ 中和溶液存儲(chǔ)/穩(wěn)定性：

存放在2-10°C，并在冷凍膠冰包中運(yùn)輸。不要冷凍。每個(gè)特定批次的產(chǎn)品標(biāo)簽和分析證書上列有過期日期。當(dāng)產(chǎn)品按照指示處理和存儲(chǔ)時(shí)，過期日期有效。注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明：本產(chǎn)品僅供研發(fā)使用，不適用于人類或其他用途。請(qǐng)查閱材料安全數(shù)據(jù)表，了解有關(guān)危險(xiǎn)和安全操作規(guī)范的信息。

涂層程序注意：采用無(wú)菌操作規(guī)范，以保持產(chǎn)品在膠原蛋白和其他溶液的準(zhǔn)備和處理過程中的無(wú)菌性。

1. 將所需量的膠原溶液從瓶中轉(zhuǎn)移到稀釋容器（如有必要）。使用無(wú)菌0.1%醋酸溶液進(jìn)一步稀釋至所需濃度。典型的工作濃度可能在50至100μg/ml范圍內(nèi)。注意：將這些建議作為指導(dǎo)，以確定您培養(yǎng)系統(tǒng)的最佳涂層條件。

2. 向培養(yǎng)表面添加適量稀釋的鼠尾膠原。

3. 在室溫下蓋好孵育1-2小時(shí)。吸去任何剩余物質(zhì)?；蛘?，孵育至表面變干。

4. 孵育后，吸去任何剩余物質(zhì)。

5. 小心用無(wú)菌培養(yǎng)基或PBS沖洗涂層表面，避免刮傷表面。

6. 涂層表面已準(zhǔn)備好使用。如果保持無(wú)菌性，也可在2-8°C潮濕或晾干存放。

使用提供的中和溶液進(jìn)行3D凝膠制備程序注意：采用無(wú)菌操作規(guī)范，以保持產(chǎn)品在膠原蛋白和其他溶液的準(zhǔn)備和處理過程中的無(wú)菌性。建議在準(zhǔn)備膠原蛋白期間將膠原蛋白和其他工作溶液冷藏并放在冰上。

1. 確定所需的膠原體積。

2. 將冷卻的中和溶液的1部分轉(zhuǎn)移至無(wú)菌混合容器或試管中。

3. 將鼠尾膠原的9部分轉(zhuǎn)移到無(wú)菌混合容器或試管中，總共為10部分。

4. 輕輕攪拌混合物或上下移液以混合。不建議使用渦流器。

5. 將鼠尾膠原混合物分配到所需的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)器皿中。6. 在37°C孵育1小時(shí)以形成凝膠。

鼠尾膠原蛋白溶液，I型部分文獻(xiàn)參考：

1. Tanzer, M. L., Cross-linking of collagen. Science, 180(86), 561-566 (1973).

2. Bornstein, P., and Sage, H., Structurally distinct collagen types. Ann. Rev. Biochem., 49, 957-1003 (1980).

3. Tomasek, J.J., and Hay, E.D., Analysis of the role of microfilaments in acquisition and bipolarity and elongation of fibroblasts in hydrated collagen gels. J. Cell Biol., 99, 536-549 (1984).

4. Roeder, B.A., et al., Tensile mechanical properties of three-dimensional type I collagen extracellular matrices with varied microstructure. J. Biomech. Eng., 124, 214-222 (2002).

5. Sato, M., et al., 3-D Structure of extracellular matrix regulates gene expression in cultured hepatic stellate cells to induce process elongation. Comp Hepatol., Jan 14;3 Suppl 1:S4 (2004).

6. Li, G.N., et al., Genomic and morphological changes in neuroblastoma cells in response to three-dimensional matrices. Tissue Eng., 13, 1035-1047 (2007).

7. Karamichos, D., et al., Regulation of corneal fibroblast morphology and collagen reorganization by extracellular matrix mechanical properties. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 48, 5030-5037 (2007).