脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑--高轉(zhuǎn)染效率！

abm的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑是一種特別的聚陽(yáng)離子和脂質(zhì)體配方，保證在包括原代細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞類型中具有高轉(zhuǎn)染效率。

艾美捷脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑（ABS-G2500）：

單位：1.0 毫升

存儲(chǔ)條件：存儲(chǔ)于4oC。請(qǐng)勿冷凍。

特點(diǎn)：

Z小毒性

在一系列細(xì)胞中表現(xiàn)Z越

應(yīng)用：

將DNA轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的貼壁真核細(xì)胞中。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑使用方法：

請(qǐng)使用以下條件作為指導(dǎo)，以在6孔板或35毫米培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

1. 在轉(zhuǎn)染前18至24小時(shí)，以70%的密度播種細(xì)胞。對(duì)于懸浮細(xì)胞，以5 x 10^5 細(xì)胞/毫升的密度播種。

2. 對(duì)于每個(gè)轉(zhuǎn)染樣本，請(qǐng)按以下方式準(zhǔn)備復(fù)合物：

溶液A：將2.0微克的DNA稀釋到100微升無(wú)血清、無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中。

溶液B：在使用前通過(guò)彈動(dòng)試管混合DNAfectin™ Plus，然后將6-10微升的DNAfectin™ Plus稀釋到100微升無(wú)血清、無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中。

在室溫下孵育溶液A和溶液B 5分鐘。

3. 合并溶液，輕輕混合以確保均勻分布，并在室溫下孵育20分鐘。

注意：復(fù)合物在室溫下穩(wěn)定3-5小時(shí)。

4. 向每個(gè)DNA-轉(zhuǎn)染復(fù)合物中加入0.8毫升無(wú)血清培養(yǎng)基，并通過(guò)劇烈彈動(dòng)試管充分混合。

5. 抽吸每個(gè)孔中的所有培養(yǎng)基，然后將1.0毫升的轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物直接加入到每個(gè)孔中（對(duì)于貼壁細(xì)胞）。對(duì)于懸浮細(xì)胞，收集細(xì)胞并以300xg離心以收集細(xì)胞沉淀，用1.0毫升轉(zhuǎn)染復(fù)合物重懸。然后將細(xì)胞和轉(zhuǎn)染復(fù)合物轉(zhuǎn)移到6孔板中。孵育細(xì)胞。

6. 在5-8小時(shí)后，移除轉(zhuǎn)染溶液，加入2.0毫升完整培養(yǎng)基（含血清和抗生素）。繼續(xù)孵育細(xì)胞。

7. 在48-72小時(shí)后，可以使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法分析轉(zhuǎn)基因的表達(dá)，或繼續(xù)進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞系的生成。

8. 制造穩(wěn)定細(xì)胞系：在存在選擇標(biāo)記的情況下，以與殺傷曲線確定中使用的密度相同的密度進(jìn)行細(xì)胞傳代。