天然腔腸素：深入研究其生物合成過程及再細(xì)胞信號傳導(dǎo)中的作用

天然腔腸素是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子，應(yīng)用非常廣泛，可用于檢測活細(xì)胞中鈣離子濃度，基因報告分析，BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，以及組織或細(xì)胞中ROS水平的化學(xué)發(fā)光檢測。

艾美捷天然腔腸素（#303）參數(shù)：

中文別名 天然腔腸素；腔腸素游離酸

英文別名 Renilla luciferin;Coelenterazine free base

分子式 C26H21N3O3

分子量 423.46

外觀 黃色固體

溶解性 溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO

純度 ＞97%(TLC)

溶液配制：

對于所有進(jìn)行熒光信號檢測的試驗建議溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。建議可用乙醇或丙二醇配制成儲存液（配制濃度可參考文獻(xiàn)推薦）。在使用時需將儲存液用合適的緩沖液稀釋成工作液。

注意：

1、在用蒸餾水或者PBS及其他的溶液進(jìn)行腔腸素儲存液的稀釋時需排除稀釋液中的氣泡。同時工作液能呈弱酸性，既可以減緩腔腸素的氧化，同時也可防止沉淀的析出。但是弱酸也有可能對后續(xù)熒光強(qiáng)度RLU的檢測造成誤差。

2、腔腸素的工作液不穩(wěn)定，避免過夜保存。

注意事項：

1、保存時若接觸空氣，時間過久會使得腔腸素氧化，造成實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確性。

2、對于儲存液的制備，較穩(wěn)定的是保存于丙二醇中，同時可加入還原劑如L-抗壞血栓，β-巰基乙醇，DTT，DTE（二硫赤糖醇），或少量的鹽酸。還原劑的存在可能會破壞熒光素酶的結(jié)構(gòu)，也會影響腔腸素的氧化速率。

3、腔腸素在醇類物質(zhì)中的冰凍保存可能會導(dǎo)致沉淀的析出（和濃度有關(guān)），可通過將溶液加熱至50～60℃至其溶解。在使用前請確保眼觀無沉淀。

4、Z適溶劑的選擇取決于多種因素，如還原劑。對于水母發(fā)光蛋白的檢測，可選用β-巰基乙醇，因為此還原劑能夠使水母發(fā)光蛋白更好地與腔腸素作用。但對于Gluc蛋白的檢測，由于蛋白中含有5對二硫鍵，在還原劑的存在狀態(tài)下不能夠檢測到熒光信號。

5、腔腸素在不同溶劑中的溶解特性：（單位：mg/mL）：

溶劑 室溫 60℃(Vortex)

Methanol 100% 46 70

Ethanol 100% 64 196

Propanol 100% 82 204

Butanol 100% 86 180

Propylene Glycol 24 240

b-Mercaptoethanol 160 268

注意：

1）腔腸素的丙二醇溶液在室溫下的溶解度較低，但是在-70℃的狀態(tài)下沒有沉淀析出。

2）腔腸素在β-巰基乙醇中的溶解度在室溫和60℃時都是最高的，但能夠穩(wěn)定存在的時間還有待進(jìn)一步測試。

6、當(dāng)使用多孔板進(jìn)行熒光值的檢測時，建議通過設(shè)置對照孔來消除由于腔腸素在工作液中不斷被氧化所帶來的誤差。