BGT-IgM (雞) ELISA Kit測(cè)定程序方案

IgM (雞) ELISA Kit：用于生物樣品中雞免疫球蛋白M（IgM）的定量測(cè)定。是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于測(cè)量雞生物樣品中的IgM。如果ELISA在預(yù)期用途之外使用，用戶可能需要優(yōu)化saiduse。

艾美捷BGT-IgM (雞) ELISA Kit：

貨號(hào)：BGT-KET-131

抗體類型：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）

宿主：山羊

特異性/靶標(biāo)：免疫球蛋白M（IgM）

規(guī)格：1.0

檢測(cè)范圍：3.125 ng/ml - 200 ng/ml

靈敏度：0.979 ng/ml

測(cè)定時(shí)間：70 分鐘

樣本類型：血漿、血清

儲(chǔ)存條件：2-8°C

試劑準(zhǔn)備：

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮物-提供的稀釋液是5X濃縮物，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，4份dH2O）稀釋1/5。

洗滌液濃縮物-提供的洗滌液是20X濃縮物，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，19份dH2O）稀釋1/20。如果儲(chǔ)存溫度較低，濃縮物中可能會(huì)形成晶體。在稀釋前將濃縮物加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結(jié)合物-通過向990µL的1X稀釋液中添加10µL的酶-抗體結(jié)合物來計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋，并避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免產(chǎn)生泡沫。

預(yù)涂層ELISA微孔板-按提供的狀態(tài)使用。打開鋁箔袋，從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

雞IgM校準(zhǔn)物-根據(jù)批特定分析證書準(zhǔn)備。

測(cè)定程序

1.所有樣本和標(biāo)準(zhǔn)品都應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。

2.應(yīng)盡快將標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣本(們)裝入ELISA孔中，以避免吸光度(OD)讀數(shù)發(fā)生偏移。使用多通道移液管可以減少這種情況的發(fā)生。

向標(biāo)準(zhǔn)品0（0.0ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品1（3.13ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品2（6.25ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品3（12.50ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品4（25ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品5（50ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品6（100ng/mL）孔中移液100μL，雙份

向標(biāo)準(zhǔn)品7（200ng/mL）孔中移液100μL，雙份

3.向預(yù)先Z定的孔中移液100μL的樣本（雙份）。

4.在室溫下孵化微孔板三十（30±2）分鐘。保持板蓋在孵化期間覆蓋并保持水平。

5.孵化后，吸去孔中的內(nèi)容物。

6.用適當(dāng)稀釋的洗滌液W全填滿每個(gè)孔，然后吸去。重復(fù)三次，共洗滌四次。如果手動(dòng)洗滌：用洗滌緩沖液W

填滿孔，翻轉(zhuǎn)板然后將內(nèi)容物倒入廢液容器中。接著通過在吸水紙上用力敲擊孔來去除殘留的緩沖液。重復(fù)三次，共洗滌四次。

7.向每個(gè)孔中移液100μL適當(dāng)稀釋的酶-抗體結(jié)合物。在室溫下孵化三十（30±2）分鐘。保持板蓋在黑暗和水平狀態(tài)下孵化。

8.如步驟5/6所述進(jìn)行洗滌和吸干孔。

9.向每個(gè)孔中移液100μLTMB底物溶液。

10.在黑暗中室溫下精確孵化十分鐘（10）。

11.十分鐘后，向每個(gè)孔中添加100μL終止溶液。

12.在30分鐘內(nèi)測(cè)定每個(gè)孔中內(nèi)容物的吸光度（450nm）。根據(jù)制造商的規(guī)格校準(zhǔn)板閱讀器。

BGT-IgM (雞) ELISA Kit文獻(xiàn)參考：

Khatun, Jannatara et al. Growth Performance, Cytokine Expression, and Immune Responses of Broiler Chickens Fed a Dietary Palm Oil and Sunflower Oil Blend Supplemented With L-Arginine and Varying Concentrations of Vitamin E. Frontiers in veterinary science vol. 7 619. 15 Oct. 2020, 

Awad EA, Najaa M, Zulaikha ZA, Zulkifli I, Soleimani AF. Effects of heat stress on growth performance, selected physiological and immunological parameters, caecal microflora, and meat quality in two broiler strains. Asian-Australas J Anim Sci. 2020;33(5):778-787. 

Dalia AM, Loh TC, Sazili AQ, Jahromi MF, Samsudin AA. Effects of vitamin E, inorganic selenium, bacterial organic selenium, and their combinations on immunity response in broiler chickens. BMC Vet Res. 2018;14(1):249. Published 2018 Aug 24. 

Ojiezeh TI et al. Humoral responses of broiler chickens challenged with NDV following supplemental treatment with extracts of Aloe vera, Alma millsoni, Ganoderma lucidum and Archachatina marginata (Cent Eur J Immunol 2015; 40 (3): 300-306)