QA-Bio-DMB唾液酸標(biāo)記試劑盒的特性和應(yīng)用

QA-Bio-DMB唾液酸標(biāo)記試劑盒包含兩套標(biāo)記試劑和一套唾液酸參考板：

標(biāo)準(zhǔn)品：

NeuAc和NeuGc定量標(biāo)準(zhǔn)品

唾液酸參考板

釋放和標(biāo)記試劑

DMB染料（1,2-二氨基-4,5-亞甲二氧基苯.2HCl）：

醋酸

醋酸中的巰基乙醇

次亞硫酸鈉（還原劑）

唾液酸對于治療性糖蛋白的穩(wěn)定性和三維構(gòu)象非常重要。已經(jīng)證明它們影響糖蛋白在血清中的半衰期，并通過這些生物治療劑影響患者的抗炎和免疫反應(yīng)?；谶@些原因，監(jiān)測這些治療性糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的唾液酸的水平和類型至關(guān)重要。

艾美捷QA-Bio-DMB唾液酸標(biāo)記試劑盒（LT-KDMB）提供了從糖蛋白中釋放唾液酸并用DMB進(jìn)行標(biāo)記所需的一切。試劑盒包含用于22個或96個糖蛋白樣品（每個樣品50-100微克糖蛋白）的試劑和材料。每次標(biāo)記應(yīng)該能夠處理每個樣品大約10皮摩爾到2.5納摩爾的唾液酸。

QA-Bio-DMB唾液酸標(biāo)記試劑盒中包括一個唾液酸參考板（包含Neu5Ac；Neu5Gc；Neu5,7Ac2；Neu5,Gc9Ac；Neu5,9Ac2；Neu5,7,(8),9Ac3Gc）以及NeuAc和NeuGc定量標(biāo)準(zhǔn)品。這三種標(biāo)準(zhǔn)品可以與釋放的唾液酸樣品一起用DMB進(jìn)行標(biāo)記。NeuAc和NeuGc定量標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋準(zhǔn)備使定量分析成為可能。

作為陽性對照，建議使用QA-Bio的胎蛋白糖蛋白，它包含NeuAc和NeuGc唾液酸，和/或作為陽性對照的定量糖肽（BQ-GPEP-A2G2S2-10U）。水可以用作陰性對照。

唾液酸的釋放 從糖蛋白中釋放唾液酸是通過溫和的酸水解進(jìn)行的。樣品和對照在80°C下用2M醋酸孵育2小時(shí)。

唾液酸標(biāo)記反應(yīng) 釋放的唾液酸用1,2-二氨基-4,5-亞甲二氧基苯-2HCl（DMB）進(jìn)行熒光標(biāo)記。酸水解樣品和過程對照加上Ludger唾液酸標(biāo)準(zhǔn)品：Neu5Ac、Neu5Gc、唾液酸參考板，如果使用的話還有Neu5,9Ac2，在50°C下用DMB孵育3小時(shí)。

通過HPLC或UHPLC分析 利用Neu5Ac和Neu5Gc標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。唾液酸參考板和Neu5,9Ac2用于唾液酸鑒定?？梢允褂?span style="font-family: Calibri;">LudgerSep R1x150mm色譜柱進(jìn)行HPLC分析，或使用LudgerSep uR2x100mm色譜柱通過UHPLC進(jìn)行分析。

QA-Bio-DMB唾液酸標(biāo)記試劑盒文獻(xiàn)參考：

Thomson RI, Gardner RA, Strohfeldt K, Fernandes DL, Stafford GP, Spencer DIR, Osborn HMI. Analysis of Three Epoetin Alpha Products by LC and LC-MS Indicates Differences in Glycosylation Critical Quality Attributes, Including Sialic Acid Content. Anal Chem. Jun 20;89(12):6455-6462.( 2017)

艾美捷科技是QA-Bio的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。