SIN載體，抗CD 19 CAR慢病毒（CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z）方案

抗CD19 CAR慢病毒是復(fù)制能力不強(qiáng)、基于HIV的VSV-G假型慢病毒顆粒，已準(zhǔn)備好轉(zhuǎn)導(dǎo)大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括原代細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。這些病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)與第二代CAR（嵌合抗原受體）連接的抗CD19（克隆FMC63）的ScFv部分，該部分含有CD8鉸鏈和跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1BB和CD3ζ信號(hào)結(jié)構(gòu)域。該構(gòu)建體還包括抗CD19 CAR盒下游的IRES增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP）序列，以促進(jìn)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的分析和分選（圖1）。

圖1。（A） 用于產(chǎn)生抗CD19 CAR慢病毒的慢病毒載體示意圖。該向量是SIN向量，它包含eGFP。（B） 構(gòu)建顯示抗CD19 CAR成分的圖。

注：該產(chǎn)品轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗CD19 CAR構(gòu)建體（CD19 ScFv-CD8-4-1BB-CD3ζ）與其他可用的抗CD19CAR慢病毒（BPS Bioscience#78600、78601和78602）相同，但在關(guān)鍵方面有所不同。該產(chǎn)品含有eGFP報(bào)告/選擇標(biāo)記，因此可以根據(jù)eGFP表達(dá)對轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞進(jìn)行分類。請參閱表1。

艾美捷抗CD19 CAR慢病毒（CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z，eGFP）（#BPS-78775）：

提供形式：50微升的抗CD19 CAR，滴度≥3×10^8 TU/ml。每批的滴度可能會(huì)有所不同；確切的數(shù)值會(huì)隨每次發(fā)貨提供。

配方：這些慢病毒是從HEK293T細(xì)胞生產(chǎn)的，經(jīng)過濃縮并重新懸浮在DMEM中。

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性：慢病毒隨干冰發(fā)貨。長期儲(chǔ)存建議在-80°C下保存慢病毒，自收到之日起可保存長達(dá)12個(gè)月。避免重復(fù)凍融。每次凍融都可能導(dǎo)致滴度顯著下降。

培養(yǎng)基：

T細(xì)胞培養(yǎng)基：TCellM™（BPS Bioscience #78753）補(bǔ)充了10 ng/ml的白介素-2（BPS Bioscience #90184）。

實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基：

解凍培養(yǎng)基3（BPS Bioscience #60186）：F-12K培養(yǎng)基（Kaighn對Ham's F-12培養(yǎng)基的改良）補(bǔ)充了10% FBS，1%青霉素/鏈霉素。

應(yīng)用：作為T細(xì)胞中抗CD19 CAR評(píng)估的陽性對照。

轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。

生成抗CD19 CAR-T細(xì)胞（僅限研究使用，不用于治療目的）。

運(yùn)輸溫度：-80°C。

抗CD 19 CAR慢病毒（CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z; SIN載體）相關(guān)產(chǎn)品：

Anti-CD19 CAR / NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line (CD19 SCFV-CD28-4-1BB-CD3ζ)

Anti-CD19 CAR-T Cells

Firefly Luciferase CD19 Knockout Raji Cell Line

CD19 Knockout Raji Cell Line

Firefly Luciferase CD19 Knockout NALM6 Cell Line

Human NK Cell Isolation Kit