LysA通用PARylation檢測試劑盒檢測工作流程方案

LysA™通用PARylation檢測試劑盒是一種基于夾心ELISA的試劑盒，旨在測量和量化細(xì)胞提取物中存在的總聚ADP核糖基化量。該試劑盒采用方便的96孔格式，包含所需的所有試劑，包括標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)允許建立定量測量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。它含有足夠的抗體、阻斷緩沖液和檢測試劑，以96孔板的形式測量細(xì)胞提取物中的PARylation水平。它還包括細(xì)胞裂解物作為測定性能的對照。

注：該測定僅適用于聚ADP核糖基化檢測。該測定在100 pM至20 nM的PARylation范圍內(nèi)呈線性。

圖1:LysA™通用PARylation檢測工作流程圖

使用抗PAR抗體來涂覆96細(xì)胞板。來自細(xì)胞的裂解物被添加到包被的孔中，因此存在于細(xì)胞裂解物中的標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)（PARylated proteins）被抗體捕獲。隨后用抗PAR一級抗體和二級HRP-標(biāo)記抗體孵育。添加化學(xué)發(fā)光的HRP底物提供了發(fā)光信號，其與細(xì)胞提取物中存在的標(biāo)準(zhǔn)桿數(shù)的量直接相關(guān)

艾美捷LysA™通用PARylation檢測試劑盒：

貨號：82123

檢測試劑盒格式：化學(xué)發(fā)光

物種：人類

需要但不提供的物料：

改良RIPA裂解緩沖液（中等強度）（BPS Bioscience #82126）

LysA™蛋白酶抑制劑雞尾酒試劑盒（BPS Bioscience #82199）

ADP-核糖基化循環(huán)抑制劑混合物（BPS Bioscience #82130）

儲存/穩(wěn)定性：

如果按照指示儲存物料，這個檢測試劑盒在收到日期起的6個月內(nèi)將表現(xiàn)最佳。

應(yīng)用：

量化培養(yǎng)細(xì)胞中PAR的總水平。

在培養(yǎng)細(xì)胞中篩選或確定PARP或PARG抑制劑的IC50。

在細(xì)胞模型中驗證PARP或PARG抑制劑。

運輸溫度 -80°C

禁忌癥：

這個檢測不允許檢測蛋白質(zhì)上的單（ADP-核糖基）（MAR）修飾。

避免使用SDS或其他濃度大于0.1%的強變性洗滌劑。

這個檢測與最多2% v/v的總洗滌劑和最多1% DMSO兼容。

避免使用濃度大于10 mM的疊氮鈉和還原劑，如二硫蘇糖醇或β-巰基乙醇。

科學(xué)類別：癌癥治療靶點

僅限研究使用

LysA™通用PARylation檢測試劑盒文獻參考：

Marques M., et al., 2019 Oncogene 38 (12): 2177-2191.

James D. I., et al., 2016 ACS Chem Biol 11 (11): 3179-3190.

Drown B. S., et al., 2018 Cell Chem Bio 25 (12): 1562-1570.