ALPCO高靈敏度促甲狀腺激素(大鼠)ELISA(96孔)檢測方案

甲狀腺刺激激素（也稱為促甲狀腺激素或TSH）是由前腦垂體腺產(chǎn)生的糖蛋白。它通過作用于甲狀腺，維持碘甲狀腺原氨酸T4和T3的正常循環(huán)水平，從而發(fā)揮重要作用。TSH的產(chǎn)生和分泌一方面受到循環(huán)中的T4和T3的負(fù)反饋控制，另一方面受到下丘腦促甲狀腺激素釋放激素（TRH）的控制。TSH分子由兩個(gè)非相同的亞單位α和β組成，它們以非共價(jià)方式結(jié)合在一起。在同種物種內(nèi)，TSH α單位在結(jié)構(gòu)上與相關(guān)糖蛋白激素（LH、FSH）的α亞單位相同。相關(guān)激素的β亞單位在結(jié)構(gòu)上是激素特異性的，因此決定了它們d特的生物活性?？刂拼笫蠹谞钕俟δ艿臋C(jī)制與人類機(jī)制w全類似。這意味著促甲狀腺激素釋放激素刺激垂體腺釋放TSH以及影響垂體腺作用的T4和T3的血清濃度。大鼠和人類甲狀腺生理之間的這種相似性使得大鼠成為評(píng)估新藥對(duì)甲狀腺代謝狀態(tài)影響的非常有用的模型。

艾美捷促甲狀腺激素(大鼠)ELISA(96孔)（ALP-55-TSHRT-E01）檢測原理：

該試劑盒是一種固相酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），采用微孔板格式，設(shè)計(jì)用于定量測量大鼠血清中的TSH。微孔板涂有特異性針對(duì)TSH的單克隆抗體。校準(zhǔn)品和樣本被移液到包被有抗體的微孔板中。然后加入多克隆辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體。在4-8°C下孵育16-24小時(shí)期間，由兩種抗體和大鼠TSH組成的三明治復(fù)合物形成。通過洗滌步驟去除非反應(yīng)性組分。向所有孔中添加一種顯色底物TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺）。在30分鐘孵育期間，底物被固定酶轉(zhuǎn)化為有色終產(chǎn)品（藍(lán)色）。通過添加鹽酸作為停止溶液（由藍(lán)變黃）來停止酶反應(yīng)。顏色強(qiáng)度與樣本中存在的大鼠TSH濃度成正比。使用微孔板讀取器在450納米處測量顏色溶液的光密度。

一般說明：

1所有試劑和樣本在使用前必須放置至室溫。所有試劑混合時(shí)必須避免產(chǎn)生泡沫。

2一旦測試開始，所有步驟都應(yīng)無中斷地完成。

3為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本使用新的一次性塑料移液管頭。

4吸光度是孵育時(shí)間和溫度的函數(shù)。開始測定前，建議所有試劑準(zhǔn)備就緒，移除蓋子，所有需要的孔固定在支架中等。這將確保每個(gè)移液步驟在無中斷的情況下有相等的經(jīng)過時(shí)間。

5作為一般規(guī)則，酶促反應(yīng)與時(shí)間和溫度成線性關(guān)系。

6應(yīng)遵循推薦的孵育時(shí)間。

7微孔板洗滌很重要。洗滌不當(dāng)?shù)目讜?huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。建議使用多通道移液管或多步移液管，或自動(dòng)微孔板洗滌系統(tǒng)。不要在孵育之間讓孔干燥。在沖洗和抽吸過程中不要刮傷包被孔。仔細(xì)沖洗和填充所有試劑。在沖洗時(shí)，檢查所有孔是否精確填充了洗滌溶液，孔中是否有殘留物。

8建議對(duì)校準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本進(jìn)行雙重測定，以識(shí)別可能的移液錯(cuò)誤。

9每次運(yùn)行都必須建立校準(zhǔn)曲線。

促甲狀腺激素(大鼠)ELISA(96孔)結(jié)果計(jì)算：

1. 計(jì)算每組校準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本的平均吸光度值。

2. 通過將每個(gè)校準(zhǔn)品的平均吸光度與其濃度作圖，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，吸光度值在垂直（Y）軸上，濃度在水平（X）軸上。

3. 使用每個(gè)樣本的平均吸光度值，從校準(zhǔn)曲線上確定相應(yīng)的濃度。

4. 自動(dòng)方法：IFU中的結(jié)果已使用4-PL（4參數(shù)邏輯）曲線擬合自動(dòng)計(jì)算。4參數(shù)邏輯是s選的計(jì)算方法。其他數(shù)據(jù)簡化功能可能會(huì)給出略有不同的值。

5. 樣本的濃度可以直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定。濃度高于最高校準(zhǔn)品的樣本必須進(jìn)一步稀釋。在計(jì)算濃度時(shí)，必須考慮這個(gè)稀釋因子。

典型校準(zhǔn)曲線示例：

以下數(shù)據(jù)僅供說明之用，不應(yīng)用來計(jì)算另一次運(yùn)行的結(jié)果。

結(jié)果的可靠性：

測定必須嚴(yán)格按照使用說明進(jìn)行。此外，用戶必須嚴(yán)格遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范（GLP）或其他適用的國家標(biāo)準(zhǔn)和/或法律。這對(duì)于使用控制試劑尤為重要。在測試程序中始終包含足夠數(shù)量的對(duì)照品以驗(yàn)證測定的準(zhǔn)確性和精確性是很重要的。只有當(dāng)所有對(duì)照品都在z定范圍內(nèi)，且所有其他測試參數(shù)也都在給定的測定規(guī)格內(nèi)時(shí)，測試結(jié)果才有效。