ALPCO-瘦素ELISA（超靈敏）樣本及標準曲線數(shù)據(jù)分析

在規(guī)律飲食周期的條件下，瘦素反映了脂肪組織的比例，顯示出指數(shù)關(guān)系。這種構(gòu)成性的瘦素合成被許多非激素和激素變量調(diào)節(jié)。在嚙齒動物和人類中，刺激因素包括過度進食、胰島素和糖皮質(zhì)激素。已經(jīng)顯示了禁食、cAMP和β-3-腎上腺素能受體激動劑的抑制作用。從這些發(fā)現(xiàn)中可以清楚地看出，瘦素是各種代謝和內(nèi)分泌反饋回路的一個組成部分。血清瘦素水平顯示出適度的晝夜變化，夜間約凌晨2點左右達到峰值。此時的瘦素值比早晨或下午早些時候測量的水平高出約30至100%。這種變化，連同食物攝入的影響，需要在收集血樣時考慮。這種ELISA試劑盒適用于測定人血清或血漿中的瘦素，以及其他生物流體（如唾液、尿液或母乳）和條件脂肪細胞培養(yǎng)介質(zhì)中的瘦素，僅限于研究使用。

ALPCO-瘦素ELISA（超靈敏）：人血清、血漿、尿液、唾液和母乳中瘦素的測定。僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷瘦素ELISA（超靈敏）（ALP-22-LEPHUU-E01）檢測原理：

瘦素ELISA（超靈敏）是一種使用兩種特異性和高親和力抗體的夾心測定法。樣品中的瘦素與包被在微量滴定板上的第一抗體結(jié)合。在接下來的步驟中，第二特異性抗瘦素抗體依次與固定的瘦素結(jié)合。第二種抗體被生物素化，并與鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶結(jié)合物結(jié)合。在封閉底物反應(yīng)中，顏色變化將根據(jù)樣品中的瘦素水平定量催化。

樣本：

這個試劑盒可以用于檢測血清、血漿、尿液、唾液、母乳和脂肪細胞條件培養(yǎng)上清液中的瘦素。在相應(yīng)的血清或EDTA血漿樣本中，沒有發(fā)現(xiàn)瘦素水平的顯著偏差。如果使用市售的檸檬酸血漿管進行準備，樣本將會被稀釋，因此測得的瘦素值將會降低。用于血清制備的血液樣本應(yīng)按照標準化的靜脈穿刺程序獲得，必須避免溶血反應(yīng)。如果營養(yǎng)狀況正常，應(yīng)在早晨或下午早些時候（下午2:00）收集人類血清和血漿樣本。瘦素水平顯示出晝夜變化，夜間約凌晨2:00達到峰值（37）。在收集血樣時，需要考慮這種變化以及食物攝入的影響。所需的血清/血漿樣本體積：25微升。血清/血漿樣本的儲存和穩(wěn)定性：儲存在緊閉的樣本瓶中。在室溫（20-25°C）下最多儲存2天，在-20°C下至少儲存2年。建議不超過五次凍融循環(huán)。在-20°C下儲存樣本2年以上對讀數(shù)沒有影響。應(yīng)盡量減少樣本的冷凍和解凍 - 5次凍融循環(huán)對樣本沒有影響。干擾：樣本中的血紅蛋白、甘油三酯和膽紅素在1毫克/毫升、100毫克/毫升和100微克/毫升的濃度下不會干擾。然而，應(yīng)由用戶驗證溶血、脂血或黃疸樣本的使用。樣本準備：樣本必須用稀釋緩沖液（DIL）稀釋。對于血清和血漿樣本，建議稀釋比例為1:10。

典型校準曲線示例：

圖1所示的標準曲線示例不能用于計算測試結(jié)果。每個研究實驗室都必須為每次進行的測試建立一個標準曲線。

1:10稀釋樣本的瘦素濃度示例計算：

- 稀釋樣本的測量信號為0.293

- 空白的測量信號為0.015

軟件程序?qū)⒏鶕?jù)標準曲線自動計算稀釋樣本的瘦素濃度。只需確定最合適的曲線擬合（這里：二次多項式）。

在這個示例案例中，程序通過解決以下方程來計算樣本中的瘦素濃度：

0.278 = -0.0089658 + 0.64743x - 0.034025x^2

0.4524 = x

如果考慮到稀釋因子（1:10），未稀釋樣本的瘦素濃度為：

0.4524 times 10 , text{ng/mL} = 4.4524 , text{ng/mL}

瘦素ELISA（超靈敏）文獻參考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning ofthe mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma proteinencoded by the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBSLett. 379:55-59.