Alpha Diagnostic International 小鼠ANA 總Ig ELISA試劑盒檢測原理

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒是一種適用于定量或滴定總抗體的免疫測定可提取核抗原特異性活性（IgG、IgA和IgM）（ENA）在血清或血漿中。其他生物液體，包括組織培養(yǎng)基）可以被驗證使用。

艾美捷Alpha Diagnostic International 小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒（ADI-5210）：

微孔板和所有其他試劑（如果未開封）在2-8°C下可穩(wěn)定保存，直到盒子標(biāo)簽上印刷的到期日期為止。工作溶液的穩(wěn)定性在試劑準(zhǔn)備部分有所說明。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒特異性：

用于涂覆微孔板的ENA是一種混合了多種可提取抗原的混合物（包括DNA、SSA/Ro、SSB/La、Scl70、Sm、RNP和Jo-1）；小鼠ANA檢測可能會檢測到針對這些抗原的抗體。ADI提供單獨(dú)的ELISA試劑盒，用于檢測特定于這些各個自身抗原的抗體。抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）HRP結(jié)合物與結(jié)合在板上的小鼠IgG、IgA和IgM類抗體反應(yīng)。IgE抗體的測定不會高于背景信號。

檢測靈敏度：

ENA涂覆水平、HRP結(jié)合物濃度和低非特異性結(jié)合樣本稀釋液經(jīng)過優(yōu)化，以區(qū)分小鼠血清樣本中抗核抗體（ANA）與背景（非抗體）信號，稀釋比例為1:100。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒檢測原理：

小鼠ANA總Ig ELISA試劑盒是基于樣本中小鼠ANA IgG、IgA和IgM與固定在微孔板上的ENA結(jié)合的原理，采用抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）特異性抗體與HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合來檢測總ANA抗體。在洗滌步驟后，加入顯色底物（TMB），通過HRP在底物上的酶促反應(yīng)生成顏色，該顏色的深淺與樣本中ANA Ig的含量成正比。加入終止溶液以終止反應(yīng)，然后使用ELISA微孔讀數(shù)儀測量450nm處的吸光度。樣本中總小鼠抗體的活性是相對于小鼠ANA標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行計算的。

樣本采集和處理：

培養(yǎng)基、血清和其他生物液體可以作為樣本，需適當(dāng)稀釋以避免溶液基質(zhì)干擾。對于血清樣本，通過靜脈穿刺采集血液，靜置凝固后，室溫離心分離血清。對于其他樣本，包括細(xì)胞培養(yǎng)基，在稀釋之前應(yīng)通過離心和/或過濾來澄清樣本。

抗體穩(wěn)定性：

建議將血清初始稀釋到工作樣本稀釋液（WSD）中，以穩(wěn)定抗體活性。這將增強(qiáng)樣本的可重復(fù)性，并在冷藏或冷凍條件下保持抗體活性多年。進(jìn)一步稀釋到低非特異性結(jié)合樣本稀釋液（LNSD），以提供低的檢測背景，稀釋倍數(shù)至少應(yīng)為初始稀釋的10倍，并應(yīng)在檢測當(dāng)天進(jìn)行。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒結(jié)果計算：

方法D. 樣本稀釋曲線的滴度

根據(jù)每個樣本的稀釋曲線計算出的抗體活性滴度被推薦為最準(zhǔn)確的定量方法。最佳的精確度可以通過以下指南來獲得：

使用檢測中間范圍的OD值指數(shù)（2.0 – 0.5 OD）；這為比較實(shí)驗組和重復(fù)實(shí)驗提供了最佳的靈敏度和重復(fù)性。通常使用任意的1.0 OD作為標(biāo)準(zhǔn)。

制備每個樣本的連續(xù)稀釋，以提供一系列信號，這些信號高于和低于所選的指數(shù)。通過準(zhǔn)確的稀釋，如果每個樣本運(yùn)行至少4個稀釋液，則可能不需要重復(fù)。

5倍稀釋方案有助于有效覆蓋一個范圍，生成高于和低于1.0 OD的OD值。為了獲得更精確的比較數(shù)據(jù)，可以將稀釋方案收緊為3倍或2倍。

可使用中間OD范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)值（例如，200 U/ml）來標(biāo)準(zhǔn)化各檢測間的數(shù)值。

計算步驟：

在樣本稀釋的逆對數(shù)坐標(biāo)系上，將每個陽性樣本的兩個稀釋液的OD值繪制在x軸上，選擇的標(biāo)準(zhǔn)值（任意或選定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）上方和下方的OD值。

從連接這兩個樣本OD值的點(diǎn)對點(diǎn)直線中，讀取與所選指數(shù)的OD相對應(yīng)的稀釋值（x軸）。

= 總Ig抗體活性單位

示例：

使用1.0 OD指數(shù)測定4種抗體的滴度。

Alpha Diagnostic International（ADI）致力于開發(fā)、制造和供應(yīng)新型診斷和質(zhì)量控制試劑及檢測試劑盒，用于人類和動物的基礎(chǔ)生物學(xué)和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特約合作代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。