天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒計算方法及文獻(xiàn)參考

天狼星紅和快綠是一種用于區(qū)分膠原蛋白與其周圍物質(zhì)的染料組合。天狼星紅專門綁定[Gly-X-Y]原纖維膠原的螺旋結(jié)構(gòu)，無論膠原類型或種類如何，而Fast Green與非膠原結(jié)合蛋白質(zhì)。通過利用這兩種染料的d特特征，Chondrex 提供了一種簡單的半定量測定試劑盒來測定培養(yǎng)細(xì)胞層和組織切片中膠原蛋白和非膠原蛋白的量（1-2）。因為該測定不需要膠原蛋白增溶，可用于測量各種組織中的總膠原蛋白含量（3-7）。由于天狼星紅和快綠分別在540 nm和605 nm處有吸收，因此提取的染料的OD值可用于計算樣品的膠原蛋白和非膠原蛋白含量。用于組織切片為10-20的一般組織學(xué)研究μm厚，膠原蛋白和非膠原蛋白的檢測靈敏度分別大于3μg/切片和50μg/切片。這個試劑盒中的試劑足以對30-50個樣本進(jìn)行染色。

艾美捷天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒：

貨號：9046

描述：總膠原蛋白定量染色試劑盒

格式： 玻璃載玻片和細(xì)胞培養(yǎng)板

檢測類型： 染料染色

檢測時間： 根據(jù)樣本類型不同而有所變化

標(biāo)準(zhǔn)范圍： 膠原蛋白：每個切片3微克

非膠原蛋白質(zhì)：每個切片50微克

樣本數(shù)量： 每個試劑盒可處理30-50個樣本

樣本類型： 培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片

推薦樣本稀釋倍數(shù)： 不適用

顯色劑： 不適用（在540和605納米處讀?。?/span>

存儲： 室溫下可保存12個月

天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒試劑盒內(nèi)容：

項目 數(shù)量 金額 存儲條件

染料溶液（90461） 1瓶 10毫升 室溫

染料提取緩沖液（90462） 2瓶 30毫升 室溫

計算結(jié)果：

要計算膠原蛋白的量，需要通過減去Fast Green在540 nm的貢獻(xiàn)來校正OD 540值，Fast Green在OD 605值中占29.1%。在OD 540和605下，膠原蛋白的顏色等效（OD值/μg蛋白）為0.0378，非膠原蛋白的為0.00204。

膠原蛋白（μg/節(jié)）=【OD 540 value – (OD 605 value x 0.291)】/0.0378

非膠原蛋白（μg/節(jié)）=OD 605 value/0.00204

注意事項1：較厚的切片在洗滌步驟中容易從載玻片上脫落，請仔細(xì)洗滌載玻片。此外，由于檢測靈敏度與載玻片上組織的表面積有關(guān)，切割較薄的切片不會顯著提高檢測靈敏度。

注意事項2：非膠原蛋白值可用于標(biāo)準(zhǔn)化樣本結(jié)果，因為蛋白質(zhì)水平與樣本的表面積或細(xì)胞密度相關(guān)。

天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒文獻(xiàn)參考：

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