缺氧探針--CY 7，高效免疫染色方案

Hypoxyprobe™-1 CY 7 Kit 組件詳細(xì)描述：

Hypoxyprobe™-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱為吡唑噻唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116 mg/ml）；在324 nm處的紫外吸收度（在0.9%鹽水中的消光系數(shù)為7020）。其游離堿形式的吡唑噻唑分子量為254.3，pKa為8.7，辛醇-水分配系數(shù)為8.5。固體Hypoxyprobe™-1在溫室陰暗環(huán)境中存儲(chǔ)了兩年，并在0.9%鹽水（100 g/升）中在4°C下保存了4.5年，沒有檢測到降解（紫外線和高效液相色譜分析）。吡唑噻唑在缺氧細(xì)胞中經(jīng)過還原激活，與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的巰基（硫氫基）形成穩(wěn)定的加合物。CY 7染料-MAb1能夠與這些加合物結(jié)合，從而通過免疫化學(xué)方法進(jìn)行檢測。

CY 7染料-MAb1是一種染料結(jié)合的鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3），以0.5 mg/ml的濃度在含有1% BSA和0.09%疊氮鈉的PBS中提供。感興趣的組織可以通過免疫組織化學(xué)在冷凍固定切片或福爾馬林固定石蠟嵌入切片上進(jìn)行研究，或者在組織解離后通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。注意：CY 7染料-MAb1與吡唑噻唑的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但免疫組織化學(xué)過程中的組織處理會(huì)沖洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫組織化學(xué)缺氧檢測依賴于缺氧組織中吡唑噻唑的蛋白質(zhì)加合物。

艾美捷CY 7：

貨號：HPB-CY 7

應(yīng)用：用于細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法或流式細(xì)胞術(shù)。該Hypoxyprobe™-1 CY 7試劑盒在福爾馬林固定、石蠟嵌入的鼠腫瘤組織中提供強(qiáng)烈的免疫染色，背景極低。

數(shù)量：

a. Hypoxyprobe™-1 CY 7試劑盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe™-1（哌莫地爾鹽酸鹽）。通常，動(dòng)物研究中使用的劑量為60 mg/kg體重。

b. 一個(gè)小瓶（100 mg和200 mg試劑盒）或兩個(gè)小瓶（1000 mg試劑盒）含有200微升的稀釋的CY 7染料偶聯(lián)IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每個(gè)小瓶含有200微升的0.50 mg/ml CY 7染料-MAb1溶液，溶劑為PBS，含1% BSA和0.09%疊d化鈉。CY 7染料-MAb1的最佳稀釋度由研究人員確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度在鼠腫瘤組織中能產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫熒光染色。CY 7染料-MAb1專為免疫熒光設(shè)計(jì)，可在熒光顯微鏡下或流式細(xì)胞術(shù)和西方印跡應(yīng)用中觀察。免疫熒光中的抗體稀釋通常低于免疫過氧化物酶檢測系統(tǒng)中使用的稀釋度。

不提供：

用于免疫組織化學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

儲(chǔ)存：

a. 將Hypoxyprobe™-1固體在室溫下避光保存（也可在2-8°C避光保存）。

b. 將CY 7染料-MAb在2-8°C避光保存。請勿冷凍。

Hypoxyprobe™-1 CY 7 Kit檢測說明：

正常或腫瘤組織缺氧的研究開始于靜脈注射、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe™-1（吡唑噻唑鹽酸鹽）溶液，劑量為60 mg/kg體重。對于25克的大鼠，這相當(dāng)于1.5 mg/鼠。在小鼠中，已使用高達(dá)400 mg/kg的劑量，未檢測到毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg的劑量在成本低的情況下可獲得良好的免疫染色。Hypoxyprobe™-1在鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給藥。注射或攝入后，Hypoxyprobe™-1會(huì)分布到所有組織，包括大腦，但僅在氧濃度低于14微摩爾（相當(dāng)于37°C下的分壓pO2 = 10 mm Hg）的細(xì)胞中與含巰基的蛋白質(zhì)形成加合物。除了腫瘤外，肝臟、腎臟和皮膚等正常組織也含有pO2等于或低于10 mmHg的細(xì)胞，因此這些正常組織會(huì)結(jié)合Hypoxyprobe™-1。Hypoxyprobe™-1在小鼠體內(nèi)的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在Hypoxyprobe™-1給藥后15到90分鐘內(nèi)收集。在收集時(shí)，組織中殘留的Hypoxyprobe™-1會(huì)在組織缺氧時(shí)結(jié)合，但與組織在15到90分鐘實(shí)驗(yàn)期間暴露于的Hypoxyprobe™-1量相比，殘留的Hypoxyprobe™-1量非常少，因此由殘留的Hypoxyprobe™-1引起的非特異性結(jié)合是不可檢測的。

除了動(dòng)物研究外，Hypoxyprobe™試劑盒還可以用于細(xì)胞培養(yǎng)。通常，細(xì)胞懸液在100到200微摩爾的Hypoxyprobe™-1存在下，在缺氧條件下孵育1到2小時(shí)。隨后，細(xì)胞通過細(xì)胞離心收集，固定并用CY 7 MAb-1進(jìn)行免疫染色。