Jena bioscience--T4 DNA Ligase無縫DNA連接和生物技術(shù)應(yīng)用工具

T4 DNA連接酶催化在雙鏈DNA或RNA中相鄰的5'磷酸和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。

艾美捷T4 DNA Ligase：

貨號：EN-149L

單位定義：一個Weiss單位被定義為在37°C下20分鐘內(nèi)催化1納摩爾的32P從焦磷酸鹽轉(zhuǎn)移到ATP，并轉(zhuǎn)化為Norit吸附不了的物質(zhì)的酶的量。

適用于一般實(shí)驗(yàn)室使用。

運(yùn)輸：在凝膠包裝上運(yùn)輸

儲存條件：在-20°C下儲存

附加儲存條件：避免凍融循環(huán)

保質(zhì)期：12個月

形態(tài)：液體（提供時含10 mM Tris-HCl pH 7.4，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，200 µg/ml BSA和50% [v/v]甘油）

濃度：2.5 Weiss單位/微升（500 CE單位/微升）

T4 DNA Ligase內(nèi)容：

標(biāo)準(zhǔn)連接緩沖液，10倍濃度。

25°C時500 mM Tris-HCl pH 7.8，100 mM MgCl2，100 mM DTT，10 mM ATP和25 µg/ml BSA

快速連接緩沖液，2倍濃度。

25°C時60 mM Tris-HCl pH 7.8，20 mM MgCl2，20 mM DTT，2 mM ATP和10% PEG

連接緩沖液中的白色沉淀是正常的，不影響反應(yīng)效率。不要加熱緩沖液，因?yàn)檫@會破壞其中的ATP。

熱滅活：

T4 DNA連接酶可以通過在65°C下孵育10分鐘來滅活。

注意：

一個粘性末端連接單位（CEU）被定義為在16°C下，1x T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液中，30分鐘內(nèi)，20微升總反應(yīng)體積中，使λ DNA的Hind III片段（5' DNA末端濃度為0.12微摩爾，300微克/毫升）連接50%所需的酶量。

一個Weiss單位大約相當(dāng)于200個CE單位。

如果NaCl或KCl的濃度超過200 mM，T4 DNA連接酶將受到強(qiáng)烈抑制。

連接平端和單堿基突出的片段需要大約50倍的酶量才能達(dá)到與粘性末端DNA片段相同的連接程度。通過添加PEG 4000（最終濃度為10% w/v）或六亞甲基氯化物，或?qū)?span style="font-family: Calibri;">ATP濃度降低到50微摩爾，可以增強(qiáng)平端連接。

為了稀釋T4 DNA連接酶以便在-20°C下儲存，應(yīng)使用含有50%甘油的儲存緩沖液；為了稀釋連接酶立即使用，建議使用1x反應(yīng)緩沖液