前列腺素E2（PGE2）ELISA試劑盒樣本的收集準備及注意事項

Cayman Chemical的前列腺素E2（PGE2）單克隆ELISA試劑盒是一種競爭性檢測，可用于尿液、血漿、組織培養(yǎng)上清液以及其他樣本基質中PGE2的定量分析。該檢測的范圍為7.8-1,000 pg/ml，靈敏度（80% B/B0）約為13 pg/ml，z低檢測限（LLOD）為11 pg/ml。本品不適用于人類或獸醫(yī)用途。

艾美捷前列腺素E2（PGE2）ELISA試劑盒：

貨號：514010

同義詞：PGE2 EIA試劑盒 - 單克隆

檢測范圍：7.8-1,000 pg/ml

靈敏度：80% B/B0：13 pg/ml

中點：50% B/B0：30-70 pg/ml

來源：動物/牛，動物/鰻魚，動物/山羊，動物/小鼠

儲存：-20°C

運輸：在美國本土使用濕冰；其他地方可能有所不同

穩(wěn)定性：≥ 1年

前列腺素E2（PGE2）ELISA試劑盒檢測原理：

這個檢測基于PGE?和一個PGE?-乙酰膽堿酯酶（AChE）偶聯(lián)物（PGE?追蹤器）對有限數(shù)量的PGE?單克隆抗體的競爭。由于PGE?追蹤器的濃度保持恒定，而PGE?的濃度變化，能夠與PGE?單克隆抗體結合的PGE?追蹤器的量將與孔中PGE?的濃度成反比。這種抗體-PGE?復合物與之前已經固定在孔中的山羊多克隆抗小鼠IgG結合。然后對板進行洗滌以去除任何未結合的試劑，接著添加Ellman試劑（其中包含AChE的底物）到孔中。這種酶促反應的產物有一種明顯的黃色，并且在412納米處有強烈的吸收。這種顏色的強度，通過分光光度法測定，與孔中結合的PGE?追蹤器的量成正比，這反過來與孵育期間孔中存在的游離PGE?的量成反比；或者吸光度 c [結合的PGE?追蹤器] c 1/[PGE?]。

樣本準備：

這項檢測已經針對包括尿液、血漿和組織培養(yǎng)液在內的廣泛樣本類型進行了驗證（見下圖）。正確的樣本儲存和準備對于獲得一致和準確的結果至關重要。在開始檢測之前，請c底閱讀本節(jié)。

一般注意事項：

所有樣本在檢測前必須不含有機溶劑。

樣本應在收集后立即進行檢測；不能立即檢測的樣本應儲存在-80℃。

鼠和小鼠來源的樣本可能含有干擾檢測的抗體，它們可能通過與山羊抗鼠板結合來干擾。我們建議所有鼠和小鼠樣本在使用此檢測之前進行純化。

尿液

由于尿液中的干擾不常見，1:2及更高比例的稀釋顯示出PGE?免疫反應性與PGE?濃度之間的直接線性相關性。然而，正常尿液中PGE?的含量與其他潛在的免疫活性代謝物相比非常低。使用我們的PGE代謝物酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（貨號514531），可以獲得更準確的PGE?生物合成和排泄指標。

血漿

收集含有肝素、EDTA或檸檬酸鈉的真空采血管中的血液。在全血收集后應立即添加吲哚美辛（足夠達到最終濃度10微摩爾）。吲哚美辛將阻止體外環(huán)氧二十碳烯酸的生成，這些物質有可能干擾此檢測。

正常血漿中PGE?的含量與其他潛在的免疫活性代謝物相比非常低。此外，血漿是一個復雜的基質，含有許多可能干擾此檢測的物質，因此建議對樣本進行純化。通過純化大量樣本（5-10毫升），可以將PGE?含量濃縮至僅0.5毫升的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）緩沖液中。這將使PGE?濃度進入標準曲線的可讀范圍。使用我們的PGE代謝物酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（貨號514531），可以獲得更準確的血漿中PGE?生物合成指標。

圖.PGE?測定的驗證曲線

培養(yǎng)基樣品

細胞培養(yǎng)上清液可以直接測定，無需純化。如果培養(yǎng)基中的PGE?濃度足夠高，可以用ELISA緩沖液將樣品稀釋10倍，則可以在不進行任何修改的情況下進行測定。當使用濃度較低的樣品（樣品不能用ELISA緩沖液稀釋）時，在與實驗中使用的培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中稀釋標準曲線。這將確保標準的矩陣與樣品具有可比性。我們建議首先運行標準曲線，以確保該試劑在特定的培養(yǎng)基中表現(xiàn)良好。

組織樣本

收集后立即在液氮中快速冷凍組織，然后在-80℃下儲存。向1 g組織中加入5 ml勻漿緩沖液（0.1 M磷酸鹽，pH 7.4，含有1 mM EDTA和10μM吲哚美辛）。用Polytron型均質器或聲波儀均質化樣品。繼續(xù)進行下面的凈化部分。或者，冷凍樣品可以在乙醇存在下粉碎，以提取PGE?。

使用Precellys 24均質機進行組織均質化

收集后立即在液氮中快速冷凍組織，并在-80℃下保存。每100 mg組織添加1 mM高均化緩沖液（0.1Mp磷酸鹽緩沖液，pH7.4，含有1 mM EDTA和10μM吲哚美辛）。使用適當?shù)脑O置用Precellys 24均質化樣品（見表1）。將組織勻漿以8000克的速度旋轉10分鐘。收集上清液并按照下文所述進行分析。樣品需要適當稀釋以進行測定。組織樣本應使用蛋白質測定法進行標準化。Cayman的蛋白質測定試劑盒（項目編號704002）可用于使蛋白質樣本標準化。