mFluor Violet 450小麥胚芽凝集素(WGA)探針實驗方案說明

AAT Bioquest 的小麥胚芽凝集素（WGA）能與N-乙酰葡萄糖胺和唾液酸結合，是目前研究較多且有用的凝集素之一。小麥胚芽凝集素可用于標記細胞膜（如：活細胞、固定細胞、組織切片、酵母、革蘭氏陽性細菌及真菌等 ），從而進行熒光成像和分析。也可用于免疫熒光（IF）、免疫組織化學（IHC）和流式細胞術（FC）。

艾美捷mFluor Violet 450小麥胚芽凝集素(WGA)探針：

貨號：AAT-25500

Ex(nm) 406

Em(nm) 445

溶    劑 Water

存儲條件 在-15℃以下保存，避光防潮

優(yōu)勢：

1.應用廣泛；

2.不受膜電位控制；

3.用于細胞膜表面的標記，有助于膜結構的成像

圖：將HeLa 細胞用濃度為 10 µg/mL 的 mFluor™ Violet 450小麥胚芽凝集素 (WGA) 探針染色 30 分鐘。使用配備紫羅蘭濾光片組的熒光顯微鏡獲取的圖像。

mFluor Violet 450小麥胚芽凝集素(WGA)探針實驗方案：

樣品分析方案

溶液配制

儲備溶液配制：

mFluor 450 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲備液 (200X)

將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲備溶液。

注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲存，或在 -20 °C 下長期儲存。

工作溶液配制：

mFluor 450 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。

注意：不同細胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL。

操作方案

活細胞染色：

1. 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。

2. 添加 100 µL mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 將細胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。

4. 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。

5. 使用 Ex/Em = 406/445 nm在熒光顯微鏡上成像細胞。

固定細胞染色：

1. 用含4%甲醛的PBS溶液固定細胞。

注意：對于固定細胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內區(qū)室染色，如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色。

2. 添加 100 µL mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 在室溫下，用 WGA 工作溶液孵育細胞 10-30 分鐘。

4. 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。

5. 使用Ex/Em = 406/445 nm在熒光顯微鏡上成像細胞。