IgM(狗)ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備&結(jié)果計(jì)算方案

IgM（狗）ELISA試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于測(cè)量IgM 狗的生物樣本。

艾美捷IgM(狗)ELISA試劑盒：

貨號(hào)：KA1958

校準(zhǔn)范圍：25至800納克/毫升

適用樣本：血漿、血清。

樣本體積：100微升

標(biāo)記：HRP偶聯(lián)

檢測(cè)方法：比色法

法規(guī)狀態(tài)：僅限研究使用（RUO）

反應(yīng)性：犬

應(yīng)用：定量

儲(chǔ)存說明：將試劑盒儲(chǔ)存在4℃

僅限研究使用（RUO）

CIgM(狗)ELISA試劑盒測(cè)定原理：

在此測(cè)定中，樣本中的IgM與已吸附在聚苯乙烯微量滴定板孔表面的抗IgM抗體發(fā)生反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗IgM抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與先前結(jié)合的IgM形成復(fù)合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟后，通過加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測(cè)定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶的量與測(cè)試樣本中IgM的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣本中IgM濃度的量度。可以通過從校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的校準(zhǔn)曲線上插值來確定測(cè)試樣本中IgM的量，并校正樣本稀釋。

需要但未提供的材料：

? 精密移液器（2微升至100微升），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 噴霧瓶或微量滴定板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微量滴定板讀數(shù)器

? 用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

? 用于樣本收集的離心機(jī)

? 用于血漿收集的抗凝劑

? 計(jì)時(shí)器

使用注意事項(xiàng)：

在使用本產(chǎn)品之前，請(qǐng)完整閱讀本協(xié)議。

僅限研究使用，不用于診斷目的。不用于人類和動(dòng)物食用。僅限體外使用

? 程序限制

當(dāng)w全理解包裝插頁說明中的信息，并遵循良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐時(shí)，將獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果?？赡苡绊憸y(cè)定性能的因素包括儀器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量以及試劑和樣本移液、洗滌技術(shù)、孵育時(shí)間或溫度的準(zhǔn)確性。不要將不同批號(hào)或來源的試劑混合或替換。

試劑準(zhǔn)備：

在使用前將所有試劑平衡至室溫（16℃至25℃）。

• 稀釋液濃縮液

提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/5（1份緩沖液濃縮液，4份dH?O）。

• 洗滌液濃縮液

提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/20（1份緩沖液濃縮液，19份dH?O）。當(dāng)儲(chǔ)存溫度較低時(shí)，濃縮液中可能會(huì)形成結(jié)晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35℃可以溶解結(jié)晶。

• 酶-抗體偶聯(lián)物

通過向每個(gè)測(cè)試條的1X稀釋液中加入10微升酶-抗體偶聯(lián)物來計(jì)算每個(gè)微量滴定板測(cè)試條所需的工作偶聯(lián)液量（每個(gè)用于測(cè)試的測(cè)試條加入990微升）。立即稀釋并使用，避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

• 預(yù)包被的ELISA微量滴定板

直接使用。打開鋁箔袋并取出板。將不會(huì)用于測(cè)定的測(cè)試條和孔放回袋中，并與干燥劑一起重新密封。

• 犬IgM校準(zhǔn)品

根據(jù)特定批次的分析證書進(jìn)行準(zhǔn)備。

結(jié)果計(jì)算：

從每個(gè)樣本的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的重復(fù)讀數(shù)，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來處理數(shù)據(jù)來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合精度較低。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上插值測(cè)試樣本值。校正血清稀釋因子，以確定原始樣本中IgM的濃度。