GeneCopoeia慢病毒濃縮試劑盒喜聞樂見 返回列表頁

GeneCopoeia慢病毒濃縮試劑盒對所有類型的慢病毒顆粒進(jìn)行簡單快速的濃縮。該試劑盒操作簡單，僅需將5×濃縮液與慢病毒上清按比例混合并孵育一段時間，正常轉(zhuǎn)速離心，即可得到濃縮的慢病毒顆粒，回收率高達(dá)90%以上，可提高100倍病毒滴度。

應(yīng)用：

用于人Bmi-1基因shRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建、病毒的濃縮及其病毒滴度的測定研究：

構(gòu)建人Bmi-1基因的慢病毒載體,通過轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞收集病毒液,濃縮病毒液并對該病毒液進(jìn)行滴度的測定。

設(shè)計以Bmi-1基因為靶點的短發(fā)夾狀RNA（sh RNA）,將3條Bmi-1基因的sh RNA片段插入至慢病毒載體,對其進(jìn)行篩選及鑒定。轉(zhuǎn)染具有高轉(zhuǎn)移性的293T細(xì)胞,收集病毒液并對病毒液進(jìn)行濃縮,利用熒光滴度法檢測病毒的滴度。

構(gòu)建含有Bmi-1-sh RNA的重組慢病毒載體,經(jīng)轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α后提取質(zhì)粒,與空載體均經(jīng)Eco RI和Bam HI雙酶切后,瓊脂糖凝膠電泳鑒定。測序結(jié)果證實重組的RNA干擾慢病毒載體均有一段與實驗設(shè)計合成的靶向鏈相符。測序結(jié)果顯示重組構(gòu)建成功。

將篩選出的重組慢病毒載體PLVX-sh RNA2-Bmi-1與包裝質(zhì)粒PLP1、PLP2和PLP/VSVG共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,同時設(shè)立空載體為對照組。收集的病毒濃縮液經(jīng)稀釋后感染293T細(xì)胞,利用熒光滴度法成功檢測出病毒滴度。

結(jié)論:成功構(gòu)建了Bmi-1基因的sh RNA慢病毒表達(dá)載體,通過轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后獲得了該基因的病毒液并對病毒液進(jìn)行濃縮,包裝成慢病毒顆粒,通過感染目的細(xì)胞后用熒光法成功測定出該病毒液的滴度,為探討下一步Bmi-1基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞的功能影響奠定了基礎(chǔ)。艾美捷科技是GeneCopoeia的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的慢病毒濃縮試劑盒。 

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