艾美捷生化試劑PsbA丨D1 protein of PSII 返回列表頁

由于PsbA（D1）蛋白質的生物學特性，在樣品中可以觀察到許多降解產物，并且在使用抗PsbA抗體時可以觀察到這些降解產物，包括表觀分子量為24kDa和16kDa的產物。D1降解是一組復雜的事件，觀察到的產物可能受到提取程序和收獲前細胞生理學的影響。D1和細胞色素b559之間可能發(fā)生交聯(lián)，使蛋白質在凝膠中的位置升高。在藍藻（PCC7942）中，通過將抗體與PsbA游離肽預孵育，三條不同的條帶競爭，表明所有條帶確實是PsbA及其前體或分解產物。還對菠菜和衣藻進行了競爭分析，確認了PsbA條帶的身份。

抗PsbA抗體不會檢測D2蛋白，因為用于產生PsbA抗體的肽與D2序列沒有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII應用實例：

不同數(shù)量的PsbA蛋白質標準品（AS01 016S）250 fmol（1）、125 fmol（2）、62.5 fmol（3）、31.25 fmol（4）、15.625 fmol（5）和2µg總蛋白，從使用蛋白質提取緩沖液PEB（AS08 300）提取的Med4（6,7）中提取。樣品用1X樣品緩沖液（NuPAGE LDS樣品緩沖液（Invitrogen））稀釋，補充50 mM DTT，在70°C下加熱5分鐘，并在裝載前保持在冰上。蛋白質樣品在4-12%的Bolt Plus凝膠、LDS-PAGE上分離，并使用罐轉移法在PVDF上吸附70分鐘。在室溫下攪拌2%封閉劑或5%非脂肪乳（溶解于20 mM Tris、137 mM氯化鈉pH 7.6和0.1%（v/v）吐溫-20（TBS-T）中）1小時后，立即封閉印跡。在室溫下攪拌，以1:10000的稀釋度（在封閉試劑中）在一級抗體中培養(yǎng)印跡1h。傾析抗體溶液，短暫沖洗印跡兩次，然后在室溫下攪拌，用TBS-T清洗1x15分鐘和3x5分鐘。將印跡在二級抗體（山羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結合物，推薦二級抗體AS09 602，Agrisera）中培養(yǎng)，在室溫下攪拌，在封閉試劑中稀釋至1:25 000，持續(xù)1h。按上述方法清洗污漬。根據(jù)制造商的說明，使用化學發(fā)光檢測試劑開發(fā)印跡。使用CCD成像儀（VersaDoc MP 4000）和Quantity One軟件（Bio-Rad）獲得斑點圖像。曝光時間為30秒。

Agrisera公司提供的植物領域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的PsbA|D1 protein of PSII。