PI(3 4 5)P3 瓊脂糖珠(蛋白標準品) 返回列表頁

脂質包被珠被設計用于蛋白質下拉實驗。用于檢測純化蛋白質、細胞裂解物中蛋白質的脂質結合，或放射性標記的體外翻譯產物的結合。

PI（3,4,5）P3珠由瓊脂糖組成，每毫升珠含有10納摩爾的結合PI（3,4-5）P2，足以進行幾次蛋白質結合實驗。每1mL珠粒包括少量對照珠粒。更多數(shù)量的控制珠也可供購買。

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脂質珠 - 蛋白質協(xié)議：

我們提供以下協(xié)議作為指南，并強烈鼓勵研究人員查閱科學文獻并進行優(yōu)化實驗，以確立對其感興趣的蛋白質z有利的條件。

充分混合珠（不要使用渦旋）。將50 – 100 微升的50%珠懸液轉移到0.5 – 1.5 毫升的管中。

以1000 x g或更低的速度離心珠。小心移除上清液，避免丟失珠。

用10倍過量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟兩次。

小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質的結合緩沖液中重新懸浮。 a. 對于純化的蛋白質，使用1-10 微克的蛋白質，用足夠的結合緩沖液稀釋形成50%脂質珠懸液。 b. 對于細胞裂解物、提取物、亞細胞組分：使用大約1 毫克的總蛋白質對1 毫升結合緩沖液。將整個1毫升的制備樣品加入到您洗滌過的珠中。

孵育蛋白質-珠溶液1-3小時。孵育可以在室溫或4°C下進行，取決于您蛋白質的穩(wěn)定性。需要連續(xù)運動以保持珠懸浮。

離心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用來監(jiān)測未結合的蛋白質。

用10倍過量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟五次。如果您選擇在結合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA），請確保在進行下一步之前將其c底洗出。

在最后一次洗滌后，通過向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類似物）并加熱至70°C 10分鐘來洗脫結合的蛋白質。

加熱后，離心珠并移除上清液。將上清液儲存在4°C下，直到分析。丟棄珠。

蛋白質可以通過SDS-PAGE分離，并通過凝膠的Coomassie藍染色、蛋白質轉移和免疫印跡來檢測感興趣的蛋白質，或進行自顯影。

文獻參考：

1) Hiromura, M., F. Okada, et al. (2004). “Inhibition of Akt kinase activity by a peptide spanning the betaA strand of the proto-oncogene TCL1." J Biol Chem 279(51): 53407-18.

2) Craig, H. E., J. Coadwell, et al. (2010). “ARAP3 binding to phosphatidylinositol-(3,4,5)-trisphosphate depends on N-terminal tandem PH domains and adjacent sequences." Cellular Signalling 22(2): 257-264.

3) Takahashi, K. and K. Suzuki (2010). “WAVE2 targeting to phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate mediated by insulin receptor substrate p53 through a complex with WAVE2." Cellular Signalling 22(11): 1708-1716.

4) Gálvez-Santisteban, M., Rodriguez-Fraticelli, A. and Martin-Belmonte, F. (2014). Phosphoinositides Coated Beads Binding Assay. Bio-protocol 4(3): e1039. 

5) Barrows, D., et al. (2016). “PREX1 Protein Function is Negatively Regulated Downstream of Receptor Tyrosine Kinase Activation by p21-activated Kinases (PAKs)." The Journal of biological chemistry 291: 20042-20054.

6) Lin, A., et al. (2017). “The LINK-A lncRNA interacts with PtdIns(3,4,5)P3 to hyperactivate AKT and confer resistance to AKT inhibitors." Nat Cell Biol 19(3): 238-251.

7) Hawse, W. F. and R. T. Cattley (2019). “T cells transduce T-cell receptor signal strength by generating different phosphatidylinositols." J Biol Chem 294(13): 4793-4805.

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發(fā)服務起家，逐步發(fā)展了廣泛的產品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。

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