PI(4)P 瓊脂糖珠(蛋白標準品) 返回列表頁

脂質(zhì)包被珠被設(shè)計用于蛋白質(zhì)下拉實驗。用于檢測純化蛋白質(zhì)、細胞裂解物中蛋白質(zhì)的脂質(zhì)結(jié)合，或放射性標記的體外翻譯產(chǎn)物的結(jié)合。

PI（4）P珠由瓊脂糖組成，每毫升珠含有10納摩爾的結(jié)合PI（4"P，足以進行幾次蛋白質(zhì)結(jié)合實驗。每1mL珠粒包括少量對照珠粒。更多數(shù)量的控制珠也可供購買。

作為Biogradetech-d家代理，艾美捷科技強烈推薦Biogradetech熱銷產(chǎn)品PI(4)P 瓊脂糖珠。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

脂質(zhì)珠 - 蛋白質(zhì)協(xié)議：

我們提供以下協(xié)議作為指南，并強烈鼓勵研究人員查閱科學文獻并進行優(yōu)化實驗，以確立對其感興趣的蛋白質(zhì)z有利的條件。

充分混合珠（不要使用渦旋）。將50 – 100 微升的50%珠懸液轉(zhuǎn)移到0.5 – 1.5 毫升的管中。

以1000 x g或更低的速度離心珠。小心移除上清液，避免丟失珠。

用10倍過量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復(fù)洗滌步驟兩次。

小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質(zhì)的結(jié)合緩沖液中重新懸浮。 a. 對于純化的蛋白質(zhì)，使用1-10 微克的蛋白質(zhì)，用足夠的結(jié)合緩沖液稀釋形成50%脂質(zhì)珠懸液。 b. 對于細胞裂解物、提取物、亞細胞組分：使用大約1 毫克的總蛋白質(zhì)對1 毫升結(jié)合緩沖液。將整個1毫升的制備樣品加入到您洗滌過的珠中。

孵育蛋白質(zhì)-珠溶液1-3小時。孵育可以在室溫或4°C下進行，取決于您蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。需要連續(xù)運動以保持珠懸浮。

離心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用來監(jiān)測未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

用10倍過量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復(fù)洗滌步驟五次。如果您選擇在結(jié)合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA），請確保在進行下一步之前將其c底洗出。

在最后一次洗滌后，通過向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類似物）并加熱至70°C 10分鐘來洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。

加熱后，離心珠并移除上清液。將上清液儲存在4°C下，直到分析。丟棄珠。

蛋白質(zhì)可以通過SDS-PAGE分離，并通過凝膠的Coomassie藍染色、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和免疫印跡來檢測感興趣的蛋白質(zhì)，或進行自顯影。

文獻參考：

1) Casamayor, A. and M. Snyder (2003). “Molecular dissection of a yeast septin: distinct domains are required for septin interaction, localization, and function." Mol Cell Biol 23(8): 2762-77.

2) Hu, Y., Z. Liu, et al. (2005). “Phosphoinositol lipids bind to phosphatidylinositol 3 (PI3)-kinase enhancer GTPase and mediate its stimulatory effect on PI3-kinase and Akt signalings." Proc Natl Acad Sci U S A 102(46): 16853-8.

3) Brombacher, E., S. Urwyler, et al. (2009). “Rab1 guanine nucleotide exchange factor SidM is a major phosphatidylinositol 4-phosphate-binding effector protein of Legionella pneumophila." J Biol Chem 284(8): 4846-56.

4) Gálvez-Santisteban, M., Rodriguez-Fraticelli, A. and Martin-Belmonte, F. (2014). Phosphoinositides Coated Beads Binding Assay. Bio-protocol 4(3): e1039.

5) Jiang, K., et al. (2016). “PI(4)P Promotes Phosphorylation and Conformational Change of Smoothened through Interaction with Its C-terminal Tail." PLoS Biol 14(2): e1002375.

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質(zhì)組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經(jīng)科學、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。

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