膠原酶 1 型（Collagenase）（生化試劑） 返回列表頁

粗制膠原酶制劑包含兩種不同膠原酶的幾種同工酶、一種巰基蛋白酶、氯鏈蛋白酶、一種類似y蛋白酶的酶和一種氨肽酶。這種膠原酶和蛋白酶活性的組合在分解細(xì)胞間基質(zhì)方面非常有效，這是組織解離的關(guān)鍵部分。該復(fù)合物的一個(gè)組成部分是一種水解酶，它優(yōu)先在天然膠原的螺旋區(qū)域中降解，特別是在序列Pro-Y-Gly-Pro中的Y-Gly鍵，其中YZ常是一種中性氨基酸。這種裂解產(chǎn)生的產(chǎn)品容易進(jìn)一步被肽酶消化。粗制膠原酶被金屬螯合劑如半G氨酸、EDTA或鄰苯二酚抑制，但不被DFP抑制。它也被α2-巨球蛋白，一種大型血漿糖蛋白抑制。酶活性需要Ca2+。每種膠原酶t有的酶譜已與用于研究的細(xì)胞來源的組織（或細(xì)胞的使用目的）相關(guān)聯(lián)，因此通過相關(guān)性已建立了幾種類型的粗制膠原酶：類型1、2、3和4。

- 類型1粗制膠原酶具有原始的膠原酶、酪蛋白酶、氯鏈蛋白酶和y蛋白酶活性的平衡。

- 類型2含有較高相對(duì)水平的蛋白酶活性，特別是氯鏈蛋白酶。

- 類型3含有Z低水平的次級(jí)蛋白酶。

- 類型4設(shè)計(jì)為特別低的y蛋白酶活性，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損傷。

- 類型5含有更高的膠原酶和酪蛋白酶值。

- 類型6含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為2:1。設(shè)計(jì)為相對(duì)于類型I（col G）膠原酶，富含類型II（col H）膠原酶。

- 類型7含有比類型1和2膠原酶高四倍的膠原酶和酪蛋白酶活性。

- 純化膠原酶，代碼：CLSPA，含有Z少的次級(jí)蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

無動(dòng)物源類型AFA、AFB和AFC，STZ1和STZ2膠原酶是從w全不含動(dòng)物成分的培養(yǎng)基中培養(yǎng)出來的，設(shè)計(jì)用于生物加工應(yīng)用，其中必須防止?jié)撛诘膭?dòng)物源性病原體的引入。次級(jí)蛋白酶的水平與類型1和2膠原酶相似。

- CLSAFA是原始的AFA等級(jí)，設(shè)計(jì)為具有與類型1和2膠原酶相似的膠原酶和次級(jí)蛋白酶。

- CLSAFB含有比CLSAFA更高的膠原酶和酪蛋白酶活性。

- CLSAFC具有類似于類型4膠原酶的特別低的y蛋白酶活性。

- CLSAFD含有比CLSAFA高兩到三倍的特定活性。

- 純化膠原酶，代碼CLSAFP含有Z少的次級(jí)蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

- STZ1和STZ2，0.22μ過濾STEMxyme AOF膠原酶/z性蛋白酶（Dispase）混合物，用于原代細(xì)胞和干細(xì)胞的分離。

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膠原酶測(cè)定是Mandl的改良方法，其中膠原酶與天然膠原共同孵育五小時(shí)，然后使用Moore和Stein, JBC, 176, 367, (1948)比色法硝基羥基吲哚法確定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以膠原酶每毫克微摩爾l氨酸表示。

膠原酶，1 型（Collagenase）用途：

粗制膠原酶廣泛用于酶促原代細(xì)胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究者使用如類型1、2、3和4的粗制膠原酶制劑，或者色譜純化的膠原酶；后者通常與t性酶、透明質(zhì)酸酶等次級(jí)酶結(jié)合使用。為了獲得Z佳結(jié)果，必須將蛋白水解活性的精確混合物定制到要解離的組織。類型與不同組織的有效性之間的相關(guān)性一直很好，但并不w美，可能部分取決于使用參數(shù)、目標(biāo)以及批次間變化。

文獻(xiàn)參考：

Adams, E. , Antoine, S. and Golstein, A.

Collagenase Action on the Synthetic Tripeptide Polymers, (Gly-Pro-Ala)n and (Gly-Ala-Pro)n , Biochim Biophys Acta 185 , 251 , 1969

Ala-aho, R. and Kahari, V.

Collagenases in Cancer , Biochimie 87 , 273 , 2005

Amsterdam, A. and Jamieson, J.

Studies on Dispersed Pancreatic Exocrine Cells. II. Functional Characteristics of Separated Cells , J Cell Biol 63 , 1057 , 1974

An Editorial.

Collagenase and Rheumatoid Arthritis , N Engl J Med 279 , 942 , 1968

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