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胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）-I和--II在調(diào)節(jié)多種組織類型的增殖和分化中起著關(guān)鍵作用1-3。IGF-I，也稱為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素C4，分子量為7.5 kDa5。其表達(dá)主要由生長(zhǎng)激素和營(yíng)養(yǎng)6調(diào)節(jié)。已知有幾種激素和肽因子影響不同組織中IGF-II的合成。IGFs的生物利用度由特定的結(jié)合蛋白（IGFBP）調(diào)節(jié)。除了高親和力的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1-6，IGFs也由IGFBP相關(guān)蛋白7,8,22結(jié)合。這些結(jié)合蛋白與IGF-I和IGF-II結(jié)合的親和力相同，或偏好IGF-II9,10。未經(jīng)預(yù)處理直接測(cè)量血清樣本中的IGFs會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的值。由于在測(cè)定孵化過(guò)程中IGF/IGFBP復(fù)合物的解離極其緩慢，只有部分IGF-II能與抗體結(jié)合并被檢測(cè)到。因此，可以應(yīng)用各種技術(shù)在測(cè)量前將IGF-II從其結(jié)合蛋白中物理分離，包括（a）酸性條件下的尺寸排除色譜法，（b）固相萃取和（c）酸-乙醇提取2,12,13。然而，這些技術(shù)要么不方便，耗時(shí)，要么給出不完整和不可重復(fù)的回收率。這種測(cè)定方法簡(jiǎn)單、快速，其結(jié)果不依賴于樣本的結(jié)合蛋白濃度。它基于所用抗體對(duì)IGF-II的高特異性。與IGF-I幾乎沒(méi)有交叉反應(yīng)。這允許通過(guò)酸化和用IGF-I阻斷游離結(jié)合蛋白來(lái)分離IGF-II。因此，內(nèi)源性IGF-II在溶液中是自由的。

人血清、血漿、尿液、唾液和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IGF-II的測(cè)定。僅供研究使用。不用于診斷程序

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Igf-2 elisa, 96孔檢測(cè)原理：

IGF-II的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是一種夾心測(cè)定法。它利用兩種特異性和高親和力的抗體來(lái)檢測(cè)這種蛋白質(zhì)。第一種抗體固定在微孔板上，加入的第二種生物s標(biāo)記的抗體與樣本中的IGF-II結(jié)合。隨后，鏈霉親和素過(guò)氧化物酶酶結(jié)合物與復(fù)合物結(jié)合。在最后的底物反應(yīng)中，顏色的變化與樣本中IGF-II的水平呈定量關(guān)系。IGF-II-IGFBP復(fù)合物通過(guò)在酸性緩沖液中稀釋而解離。IGFBPs被過(guò)量的IGF-I阻斷，從而允許游離IGF-II的測(cè)量。使用這種方法，IGFBPs并沒(méi)有被移除，但是它們的功能，因此它們?cè)跍y(cè)定中的干擾被中和。由于IGF-II抗體與IGF-I的交叉反應(yīng)性很低，過(guò)量的IGF-I不會(huì)干擾第一種抗體與IGF-II的相互作用。

1 樣本類型

血清和血漿

血清和肝素/EDTA血漿的檢測(cè)結(jié)果具有可比性。適用于血清樣本以及肝素、EDTA和檸檬酸血漿樣本。必須考慮抗凝劑可能對(duì)樣本造成的稀釋效應(yīng)。此外，適用的樣本還包括：尿液、唾液（濃度較低，至少需稀釋1:10）、和細(xì)胞培養(yǎng)基（含5%胎牛血清，至少需稀釋1:5）。其他體液或細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IGF-II濃度可能與血清值有顯著差異。

2 樣本采集

應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)靜脈采血法進(jìn)行血液樣本采集。避免使用溶血樣本。

3 所需樣本體積

10 ?L

4 樣本穩(wěn)定性

應(yīng)按照一般推薦的方法盡快處理樣本，并盡快冷藏。如果樣本采集和測(cè)定之間有較長(zhǎng)時(shí)間間隔，應(yīng)將未稀釋的樣本儲(chǔ)存在-20°C或更低溫度的緊密封閉塑料管中。避免血清/血漿的反復(fù)凍融（如果需要，請(qǐng)分裝），盡管在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)IGF-II水平在幾次凍融周期后不受影響。

5 干擾

樣本中的甘油三酯、膽紅s和血紅蛋白在分別達(dá)到100mg/mL、200?g/mL或1mg/mL的濃度時(shí)不會(huì)干擾檢測(cè)。然而，應(yīng)由用戶驗(yàn)證使用溶血、脂血或黃疸樣本。

6 樣本稀釋

用樣本緩沖液SB1進(jìn)行1:404稀釋 - 單步稀釋：在PE/PP管中加入2015 ?L樣本緩沖液SB（建議使用多通道移液器進(jìn)行大量系列操作）。隨后加入5 ?L樣本（稀釋1:404）。孵育至少15分鐘，最多2小時(shí)。用于測(cè)定的體積為50 ?L。

兩步稀釋：因?yàn)槭褂?0 ?L樣本可以提高移液準(zhǔn)確性，也可以使用兩步稀釋。首先，在PE/PP管中加入1000 ?L樣本緩沖液SB，然后加入10 ?L樣本（稀釋1:101）。將50 ?L這種溶液與150 ?L樣本緩沖液SB混合（稀釋1:404）。孵育至少15分鐘，最多2小時(shí)。用于測(cè)定的體積為50 ?L。

文獻(xiàn)參考：

1) Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2) Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messenger ribonucleic acidand gene structures, serum, and tissue concentrations. Endocr Rev. 10:68-91

3) Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York: Elsevier.

4) Klapper DG, Svoboda ME, Van Wyk JJ. 1983 Sequence analysis of somatomedin-C: confirmation ofidentity with insulin-like growth factor-I. Endocrinology. 112:2215-2217.

5)Rinderknecht E, Humbel RE. 1978 The amino acid sequence of human insulin-like growth factor I and itsstructural homology with proinsulin. J Biol Chem. 253:2769-2276.

6) Clemmons DR, Van Wyk JJ. 1984 Factors controlling blood concentration of somatomedin C. ClinEndocrinol Metab. 13:113-143.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

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