抗AHA 2 p| ATP酶2磷酸化，質(zhì)膜型 返回列表頁

植物和真菌的質(zhì)膜H+ATP酶產(chǎn)生質(zhì)子梯度，通過H+同向轉(zhuǎn)運(yùn)體驅(qū)動(dòng)營養(yǎng)物質(zhì)的主動(dòng)運(yùn)輸

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抗AHA 2 p| ATP酶2磷酸化，質(zhì)膜型：

免疫原：來自擬南芥（Arabidopsis thaliana）AHA2蛋白序列的KLH偶聯(lián)肽，UniProt: P19456, TAIR: At4g30190

宿主：兔

克隆性：多克隆

純度：抗原親和純化血清，在pH 7.4的PBS中

格式：凍干

數(shù)量：50微克

復(fù)溶：復(fù)溶時(shí)，加入50微升的無菌或去離子水。

儲(chǔ)存：凍干/復(fù)溶后的產(chǎn)品應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C；一旦復(fù)溶，請(qǐng)分裝以避免反復(fù)凍融。請(qǐng)?jiān)诖蜷_管子前短暫離心以避免由于凍干物料粘附在管蓋或管壁上而造成的任何損失。

測(cè)試應(yīng)用：西方印跡（WB）

推薦稀釋比例：1:10000（WB）

預(yù)期|明顯的分子量：104.4 | kDa

確認(rèn)的反應(yīng)性：莧菜、擬南芥、甜菜

預(yù)測(cè)的反應(yīng)性：甘藍(lán)、金縷梅、薺菜、鹽芥、蘿卜

在以下物種中無反應(yīng)：目前沒有已知的預(yù)測(cè)反應(yīng)性確認(rèn)例外

應(yīng)用實(shí)例：

樣品：

1 - 重組蛋白MBP-AHA2的C末端區(qū)域，磷酸化處理

2 - 重組蛋白MBP-AHA2的C末端區(qū)域，隨后去磷酸化

3 - 重組蛋白MBP，磷酸化處理

4 - 重組蛋白MBP-AHA2的C末端區(qū)域，Thr947Ala，磷酸化處理

5 - 標(biāo)記：分子量標(biāo)記

1微克/孔的在大腸桿菌中生產(chǎn)的重組蛋白，并通過親和色譜純化，在反應(yīng)混合物（30微升）中孵育。3微升的反應(yīng)物與6微升的Laemli 2X混合并在95°C下變性5分鐘。樣品在10% SDS-PAGE上分離，并在一夜之間（ON）轉(zhuǎn)移到PVDF（Inmobilon?-FL）（孔徑0.45微米）上，使用濕法轉(zhuǎn)移。膜用3%脫脂牛奶封閉2小時(shí)/室溫下?lián)u動(dòng)。膜在1:10000的稀釋度下用一抗在3%脫脂牛奶TBS中90分鐘/室溫下?lián)u動(dòng)。倒掉抗體溶液，膜短暫沖洗兩次，然后在室溫下用TBS-T搖動(dòng)15分鐘和5分鐘各3次。膜在1:5000的稀釋度下用匹配的二抗（抗兔IgG辣根過氧化物酶偶聯(lián)）在90分鐘/室溫下?lián)u動(dòng)。膜如上所述洗滌，并用以下化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑顯影：AgriseraBright。曝光時(shí)間為2分鐘。

西班牙瓦倫西亞理工大學(xué)IBMCP的Cristian Mayordomo提供

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