產(chǎn)品及特點

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有鹿的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù)PCR原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點：

• 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA。
• 根據(jù)鹿保守區(qū)域設(shè)計引物，能專一性地檢測出樣品中的鹿成分，包括馬鹿、梅花鹿、坡鹿、水鹿和白唇鹿，但不能檢測其他動物成分。
• 熒光定量PCR檢測，既可以定量，也可以定性，比常規(guī)PCR更加靈敏和靈活。
• 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為2.0小時。
• 一管式閉管操作，降低了交叉污染。
• 提供陽性標準品，便于分析實驗結(jié)果。
• 對混合樣品中鹿成分的檢測下限為0.1%，對樣品中鹿成分的核酸檢測下限為 1.0ng/µL。
• 本只能用于科研，足夠50次20μL體系的熒光定量PCR。
• 本產(chǎn)品參考國家標準GB/T21106-2007制備。

規(guī)格及成分

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

自備試劑

DNA模板

使用方法

一、稀釋標準曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供動物樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

• 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
• 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
• 在7號管中加入5 μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
• 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
• 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
• 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

• 用自選方法純化樣品的DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
• 如果有N個樣品，則需要進行N+2個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。如果用本試劑盒自帶的天凈沙核酸釋放劑試用裝，則登陸公司網(wǎng)站輸入產(chǎn)品名稱天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號61202下載。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進行）

• 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號陽性對照稀釋液，濃度為10000拷貝/μL）。下面只描述定量分析的步驟，定性分析只是把6個標曲反應(yīng)縮減成1個，其余不變。
• 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

注:僅ABI7500、7700和7900儀器需要使用ROX作為對照，其他熒光PCR儀器（如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000和LightCycler480）不需要使用ROX，則用水替代。

• 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行qPCR（具體PCR參數(shù)可以根據(jù)qPCR儀器的不同而自行優(yōu)化）。

四、qPCR反應(yīng)參數(shù)

五、數(shù)據(jù)處理

• 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
• 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

鹿源性成分可視化LAMP檢測試劑盒