細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里常見和基本的實(shí)驗(yàn)，但卻不是簡(jiǎn)單的。

  如果細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)不好，下一步實(shí)驗(yàn)根本就沒辦法繼續(xù)。

 

  培養(yǎng)細(xì)胞怕的就是細(xì)胞出現(xiàn)污染，發(fā)現(xiàn)的早還能清洗一下，加大雙抗的用量，換個(gè)培養(yǎng)基垂死掙扎一下，發(fā)現(xiàn)的晚，細(xì)胞基本都飄了，這個(gè)時(shí)候已經(jīng)無力回天。

 

  細(xì)胞污染分為：

  1.物理污染

  2.化學(xué)污染

  3.生物污染

 

  物理污染主要是源于紫外線，溫度等物理因素影響。

  減少物理污染的方式有：使用質(zhì)量好的培養(yǎng)箱、保持培養(yǎng)箱不斷電，定期維護(hù)培養(yǎng)箱等等。這樣可以將物理污染控制到一個(gè)比較小影響的范圍。

 

  化學(xué)污染主要是培養(yǎng)器皿的清潔不到位造成的一些洗滌劑的殘留，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。減少化學(xué)污染我們平時(shí)需要對(duì)器皿清洗流程多加注意。首先用去污粉或洗滌劑擦洗；再用自來水沖洗；后用蒸餾水潤(rùn)洗2～3次，即稱“一擦、二洗、三潤(rùn)”。玻璃儀器洗潔凈的標(biāo)志是器壁上附著的水不聚成水滴也不成股流下。

 

  生物污染主要是一些微生物的污染，分為細(xì)菌污染、真菌污染和支原體污染。

 

  細(xì)菌污染多數(shù)情況下培養(yǎng)液會(huì)出現(xiàn)：短時(shí)間內(nèi)變黃、明顯渾濁現(xiàn)象。

  倒置顯微鏡下觀察，可見細(xì)胞表面及周圍有大量細(xì)菌存在，細(xì)胞停止生長(zhǎng)并可能作為細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物被“吃掉”。

  處理方法：在細(xì)菌污染早期建議首先使用PBS清洗，加大抗生素的使用量（5倍），處理0.5-2小時(shí)，再消化處理，重新?lián)Q一個(gè)新的培養(yǎng)皿。

  但一般只在細(xì)菌污染早期有效，污染后期還是建議直接扔掉，避免污染其他細(xì)胞。

 

  真菌污染后一般會(huì)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的成團(tuán)絮狀物，一般肉眼可見，搖晃一下培養(yǎng)基，會(huì)隨著培養(yǎng)基一起浮動(dòng)，倒置顯微鏡下可以看見細(xì)胞之間有縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀菌絲。

  處理方法：首先使用PBS多沖洗幾次，加大抗生素的使用量（1倍），處理0.5-2小時(shí)，更換新鮮培養(yǎng)基，連續(xù)處理2－3天。但抗生素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響也很大，如果持續(xù)有霉菌長(zhǎng)出來建議直接扔掉，不然后期的細(xì)胞也會(huì)達(dá)不到實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量。孢子可通過空氣散布，好重新消毒培養(yǎng)箱，污染的細(xì)胞單獨(dú)存放，操作時(shí)酒精擦手。

 

  支原體是一種類似細(xì)菌但不具有細(xì)胞壁的原核微生物，是目前發(fā)現(xiàn)的小的簡(jiǎn)單的原核生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖。支原體形態(tài)多變，在支原體污染較小的時(shí)候?qū)?xì)胞生長(zhǎng)影響不是很明顯，但如果越來越嚴(yán)重將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢。甚至從培養(yǎng)器皿脫落。

  確認(rèn)是否有支原體可以做基因診斷:利用DNA探針對(duì)支原體診斷其敏感性稍差，但特異性高;用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，敏感性、特異性均高。

  清除支原體的方法一般可以使用支原體清除劑，但目前的清除劑并不能達(dá)到*清除支原體的效果，只能抑制到一個(gè)支原體影響較小的狀態(tài)。

 

  有時(shí)候細(xì)胞背景很干凈無明顯污染物，但又確實(shí)狀態(tài)不好，那就需要從操作上來找原因了，一般細(xì)胞還是比較好養(yǎng)普通的消化傳代操作就能維持細(xì)胞一個(gè)很好的狀態(tài)，但也有一些細(xì)胞需要特別注意一下。

 

  舉個(gè)例子！

  正常的MCF10A是一個(gè)上皮樣細(xì)胞，形態(tài)比較規(guī)則，但一旦消化過度，他就會(huì)大量死亡。

  一般新手在消化細(xì)胞的時(shí)候需要在顯微鏡下多觀察，不像養(yǎng)細(xì)胞非常有經(jīng)驗(yàn)的人，對(duì)每一個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性都非常了解。顯微鏡下觀察到細(xì)胞有回縮的狀況就可以用胰酶輕輕將細(xì)胞吹下來終止消化了。

  正常的J774A.1S是處于一個(gè)圓形的狀態(tài)，但如果消化操作不當(dāng)，它的形態(tài)就會(huì)發(fā)生變化呈梭形。

  為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的狀況呢？

  主要是因?yàn)镴774A.1容易貼壁，如果你在消化傳代的時(shí)候直接在皿里面終止消化，它很快又會(huì)重新貼到皿底，你需要將胰酶消化后的細(xì)胞混合液一起加到含培養(yǎng)基的離心管里面終止消化，離心，重懸再鋪板，操作過程要迅速。

  以上就是關(guān)于如何養(yǎng)好細(xì)胞，給出的一些解決辦法，希望對(duì)大家在細(xì)胞培養(yǎng)方面能起到幫助。