HPV16-GFP假病毒說明書

 

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：HPV假病毒 

【預期用途】

用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測。

【檢驗原理】

中和抗體在體外與假病毒中和，使得假病毒喪失感染細胞的能力，進入細胞的假病毒會表達EGFP等蛋白，通過Elispot讀板儀掃描并計數(shù)每孔熒光斑點數(shù)，通過與假病毒對照組熒光斑點數(shù)比較，計算其抑制百分比，通過計算公式可以計算出當假病毒50%被抑制時抗體的稀釋倍數(shù)，來計算其ID₅₀,用ID₅₀來表示抗體對假病毒中和活性大小。

【主要組成成分】

HPV假病毒顆粒，L1和L2蛋白以及報告基因，自折疊成HPV假病毒顆粒

【儲存條件及有效期】

-80℃ 密封貯存。。

避免反復凍融。

生產(chǎn)日期及有效期詳見標簽。

【樣本要求】HPV16-GFP假病毒說明書

樣本為HPV假病毒，可在體內(nèi)復制一輪，操作時需在無菌條件下操作。

【檢驗方法】

1 預先4-8小時鋪293FT細胞于96孔板，每孔細胞數(shù)為1.5×10⁴ ，置于37℃、 5% CO₂孵箱中培養(yǎng)。

2 加樣順序

2.1 40倍初始稀釋：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入152μl DMEM培養(yǎng)基，其余各孔中加入120μl DMEM培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品8μl/孔，每樣品兩復孔。

2.2 10倍初始稀釋：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入128μl DMEM培養(yǎng)基，其余各孔中加入120μl DMEM培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品32μl/孔，每樣品兩復孔。

加樣順序表HPV16-GFP假病毒說明書

3樣品稀釋：將多道電動移液器調(diào)至40μl移液和100μl混勻程序，對B4- B11孔中液體輕柔的反復吹吸8次充分混勻，然后轉(zhuǎn)移40μl液體至對應的C4- C11孔，輕柔的反復吹吸8次后轉(zhuǎn)移至D4-D11孔，以此類推，從G4-G11孔中吸棄40μl液體。

5.2.4 用DMEM培養(yǎng)基將假病毒稀釋至200TCID₅₀，于第B3-G11孔，每孔加120μl。

5.2.5將稀釋板4℃ 放至1小時。

5.2.6 從稀釋板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物（或培養(yǎng)基）貼壁緩緩加入預先已鋪好細胞的培養(yǎng)板對應孔中，輕拍培養(yǎng)板四周混勻。  

5.2.7 將細胞培養(yǎng)板置于37℃、5% CO₂的孵箱中培養(yǎng)60-96小時。

5.2.8 ELISPOT讀板儀進行檢測，計算感染抑制率（%）=1-（樣本檢測值-細胞對照值）/（病毒對照值-細胞對照值）×100%。

5.2.9 計算ID₅₀。

【陽性判斷值】

中和實驗過程中需要設(shè)置陰性對照，陽性對照，作為參照，來判斷實驗是否成立，陰性對照ID50小于30，陽性ID50大于30作為判斷值

【產(chǎn)品性能指標】

1. 外觀

外觀應滿足如下要求：

1.1包裝完整，無破損；外觀應整潔，文字符號標識清晰；

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品僅供中和抗體體外檢測。

2. 減少反復凍融

3. 流水或者4℃融化使用。

4. 無菌操作。

5. 本產(chǎn)品不能重復使用。

HPV16-GFP假病毒說明書