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熒光法測定DNA濃度
閱讀:1460 發(fā)布時間:2018-9-19這種染料使用僅結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料來測量DNA濃度。當與DNA結(jié)合時,這種染料的熒光被大大放大。
1。打開信標2000儀器,讓它預熱30分鐘至1小時,然后采取任何測量。
2。為了生成標準曲線,將下列量的DNA分為Eppnordf管:
30納克,20納克,10納克,5納克,2.5納克,1納克,0.5納克。還需要2個沒有DNA的管。一個管將接收染料,另一個將不接收染料(空白)。
DNA可以在TE中稀釋,但添加到試管中的大體積應為5微升或更少。
三。在標準曲線的范圍內(nèi)(優(yōu)選在該范圍的中點)的未知DNA對管的等量。
4。向每個試管中加入200微升PanVera DNA分析緩沖液并充分混合(重要:DNA分析緩沖液必須使用,H20或其他緩沖液不能工作)。
5。在信標2000中準備和標記用于熒光測量的玻璃管。
6。添加6微升PANVRA DNA檢測染料到每個反應和渦流(染料可以添加到所有的管,然后所有樣品讀??;在染料添加10分鐘內(nèi),值沒有顯著改變)。
7。在染料加入10分鐘內(nèi)測定總強度值。使用程序γ3(靜態(tài)測量用23度的單個空白值)。
8。標準曲線應該是線性的。從標準曲線中確定未知的DNA濃度。