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熒光法測(cè)定DNA濃度

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這種染料使用僅結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料來(lái)測(cè)量DNA濃度。當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí),這種染料的熒光被大大放大。

1。打開(kāi)信標(biāo)2000儀器,讓它預(yù)熱30分鐘至1小時(shí),然后采取任何測(cè)量。

2。為了生成標(biāo)準(zhǔn)曲線,將下列量的DNA分為Eppnordf管:

30納克,20納克,10納克,5納克,2.5納克,1納克,0.5納克。還需要2個(gè)沒(méi)有DNA的管。一個(gè)管將接收染料,另一個(gè)將不接收染料(空白)。

DNA可以在TE中稀釋,但添加到試管中的大體積應(yīng)為5微升或更少。

三。在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)(優(yōu)選在該范圍的中點(diǎn))的未知DNA對(duì)管的等量。

4。向每個(gè)試管中加入200微升PanVera DNA分析緩沖液并充分混合(重要:DNA分析緩沖液必須使用,H20或其他緩沖液不能工作)。

5。在信標(biāo)2000中準(zhǔn)備和標(biāo)記用于熒光測(cè)量的玻璃管。

6。添加6微升PANVRA DNA檢測(cè)染料到每個(gè)反應(yīng)和渦流(染料可以添加到所有的管,然后所有樣品讀??;在染料添加10分鐘內(nèi),值沒(méi)有顯著改變)。

7。在染料加入10分鐘內(nèi)測(cè)定總強(qiáng)度值。使用程序γ3(靜態(tài)測(cè)量用23度的單個(gè)空白值)。

8。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是線性的。從標(biāo)準(zhǔn)曲線中確定未知的DNA濃度。

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