培養(yǎng)操作及注意事項說明
一．產(chǎn)品簡介
1、細胞名稱：SCL-1；人皮膚磷癌細胞
2、生長特性： □ 貼壁□ 懸浮□半懸浮半貼壁
3、細胞生長條件：
培養(yǎng)條件90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
溫度37℃
空氣條件5% CO2,100% AIR
傳代方法1:2傳代，2~3天換液
凍存條件90%FBS+10%DMSO
二．使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2
細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)
或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS
清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細
胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將
懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，
后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS
清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細
胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸
液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入
液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃
水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心
5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2
細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

附:
T25瓶細胞處理方法
收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，
請即時聯(lián)系。并進行以下操作：
1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。
4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一
張）。
5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)
基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。
②若細胞密度較大，達到80%以上，將細胞傳代培養(yǎng)。
注：
培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運輸過程
中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸
浮的情況，這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)
皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。（這
里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%，可以增加到
25%FBS濃度） 收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當天盡快聯(lián)系并提
供圖片，以便售后處理。7天內(nèi)反饋，細胞本身問題免費重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情
況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費售后。