桿狀病毒穿梭載體bacmid小量抽提試劑盒

上海雅吉生物的桿狀病毒穿梭載體bacmid小量抽提試劑盒(Baculovirus Shuttle Vector Bacmid Mini Preparation Kit, 簡稱Bacmid Miniprep Kit)是一種從大腸桿菌DH10Bac中簡單快速抽提高質量可*應用于昆蟲細胞轉染的bacmid的試劑盒。
      主要特點：簡單快速，不使用劇毒試劑，無須酚氯抽提，無須過柱純化，有效解決bacmid分子量大、抽提難度高等系列問題，確保抽提獲得的bacmid可*用于昆蟲細胞轉染。
      當目的基因被插入到pFastBac系列載體中構建成目的重組質粒后，該重組質?？捎糜谵D化大腸桿菌DH10Bac從而發(fā)生位點特異的轉座(site-specific transposition)，藍白斑篩選和PCR鑒定篩選含有重組bacmid的重組子，再使用本試劑盒進行bacmid的小量抽提即可獲得可轉染昆蟲細胞的bacmid DNA。
      桿狀病毒穿梭載體bacmid小量抽提試劑盒在抽提bacmid的同時，也會抽提輔助質粒(helper plasmid)和未重組的pFastBac質粒。抽提獲得的bacmid等質?；旌衔锟梢灾苯佑糜谵D染昆蟲細胞以包裝桿狀病毒，zui終用于目的蛋白在昆蟲細胞中的大量表達。
      Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)是由Luckow等人于1993年發(fā)展的一種快速而有效產生重組桿狀病毒的方法。該系統(tǒng)主要包括以下兩個組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因插入后受桿狀病毒特異性啟動子(baculovirus-specific promoter)調控表達；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質粒(helper plasmid，用于表達轉座必須的轉座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株。將pfastBac重組質粒轉化該菌株可發(fā)生pfastBac重組質粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發(fā)生轉座，從而形成重組的bacmid。
      利用Bac-to-Bac桿狀病毒感染昆蟲細胞產生重組蛋白主要包括以下實驗步驟：(1)把目的基因克隆到pFastBac載體產生重組質粒；(2)轉化pFastBac重組質粒到DH10Bac大腸桿菌感受態(tài)細胞產生重組bacmid；(3)利用提取重組bacmid DNA；(4)將重組bacmid DNA轉染進入昆蟲細胞(推薦使用C0551 LipoInsect™轉染試劑)以產生重組桿狀病毒；(5)擴增重組的桿狀病毒并用其感染昆蟲細胞以大規(guī)模表達重組目的蛋白。
      本試劑盒抽提獲得的高質量bacmid DNA可以直接用于轉染昆蟲細胞，生產的LipoInsect™轉染試劑(C0551)適用于將pFastBac等桿狀病毒表達載體制備的bacmid轉染到Sf9、Sf21和High Five™等昆蟲細胞以用于Bac-to-Bac®、BaculoDirect™和InsectSelect™表達系統(tǒng)的蛋白表達。LipoInsect™轉染試劑的轉染效率非常高，對昆蟲細胞Sf9的實測陽性率可達98%以上。
      關于昆蟲細胞系統(tǒng)的蛋白表達與純化的詳細介紹 
      一個包裝的本產品可以進行50次bacmid的小量抽提。

包裝清單：

保存條件：
      室溫保存，一年有效。
注意事項： 
      *次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加入到溶液I (懸浮液)中，混勻，并在瓶上做好標記。加入RNase A后須4℃存放。
      溫度較低時，溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，37℃水浴加熱溶解，混勻后使用。
      溶液II請勿過分劇烈混勻，否則會產生大量氣泡。
      溶液II使用完后，請注意蓋緊瓶蓋，以避免被空氣中二氧化碳酸化。
      本試劑盒所有操作均在室溫進行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行，但在4℃進行離心也是可以的。
      溶液II有強堿性，溶液II和溶液III對人體都有刺激性，操作時請小心，并注意適當防護。
      僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。