Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit）是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。可以使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進行檢測。

   Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒?？梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進行檢測。
      Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，參與細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。
      Annexin V選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷脂酰絲氨酸主要分布在細胞膜內(nèi)側(cè)，即與細胞漿相鄰的一側(cè)。在細胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側(cè)。磷脂酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。
      用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。
      Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-FITC可以進入到細胞漿內(nèi)，與位于細胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細胞呈現(xiàn)綠色熒光。
      本試劑盒的流式檢測效果參考圖1和圖2，熒光顯微鏡檢測效果參考圖3。

圖1.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測細胞凋亡的效果圖。Jurkat細胞未經(jīng)處理(A)或用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細胞儀進行細胞的散射和熒光檢測。從圖中可以看出，經(jīng)過凋亡誘導(dǎo)劑喜樹堿處理后的細胞，其Annexin V-FITC染色陽性并且PI染色陰性的細胞，即凋亡細胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽性的細胞，即壞死細胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現(xiàn)的細胞點是許可范圍內(nèi)的檢測誤差。實測數(shù)據(jù)可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

圖2.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測效果驗證圖。Jurkat細胞用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時后，未經(jīng)染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進行雙染(D)。從圖中可以看出，未經(jīng)染色的是雙陰性細胞(A)，僅PI染色后出現(xiàn)了預(yù)期的PI染色陽性的細胞，僅Annexin V-FITC染色出現(xiàn)了預(yù)期的Annexin V-FITC染色陽性的細胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現(xiàn)了預(yù)期的僅Annexin V-FITC染色陽性的凋亡細胞和雙陽性的壞死細胞。出現(xiàn)的非預(yù)期的細胞點*在許可的誤差范圍內(nèi)。實測數(shù)據(jù)可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
      一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個細胞樣品。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
C1062-1    Annexin V-FITC    100μl
C1062-2    Annexin V-FITC結(jié)合液    12ml
C1062-3    碘化丙啶染色液    220μl
—    說明書    1份
保存條件：
      4℃保存，半年有效。Annexin V-FITC和碘化丙啶染色液需要避光保存。為了長期保存，可以把碘化丙啶染色液適當(dāng)分裝后-20℃保存，Annexin V-FITC結(jié)合液可以直接-20℃保存。
注意事項：
      如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
      染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
      如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
      熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
      用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
      需自備PBS。
      僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。