細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒

細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒（Senescence β-Galactosidase Staining Kit）是一種基于衰老時衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase; SA-β-Gal）活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進行染色檢測的試劑盒。

細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase; SA-β-Gal)活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細(xì)胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。
      絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態(tài)。此時細(xì)胞仍然是存活的，但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。衰老的細(xì)胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導(dǎo)細(xì)胞分裂，并且衰老細(xì)胞的細(xì)胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠，也不同于細(xì)胞生長接觸抑制的情況。衰老細(xì)胞通常體積變大，并表達(dá)在pH6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。細(xì)胞衰老也被認(rèn)為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。
      細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍(lán)色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本產(chǎn)品染色的染色效果請參考圖1。

圖1. 正常細(xì)胞和衰老細(xì)胞用細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒染色后的示例圖片。
      本試劑盒僅染色衰老細(xì)胞，不會染色衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞
(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞。
      細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒主要特點：本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，是同類產(chǎn)品中*的能兼容普通的細(xì)胞培養(yǎng)用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導(dǎo)致的染色偏弱、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質(zhì)的耗材、容器或玻璃容器進行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質(zhì)的容器或耗材，否則可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實驗觀察。即使嚴(yán)格按照要求操作，也會在染色時間比較長的情況下，容易出現(xiàn)絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，對耗材或容器的材質(zhì)無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會產(chǎn)生沉淀或不溶物，使用更加便捷。

圖2. 本試劑盒優(yōu)化前后的對比圖。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料如移液管、多孔板等會產(chǎn)生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優(yōu)化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。
      如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定。對于普通切片的滴染足夠檢測100個樣品。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
C0602-1    β-半乳糖苷酶染色固定液    100ml
C0602-2    X-Gal溶液    5ml
C0602-3    β-半乳糖苷酶染色液A    1ml
C0602-4    β-半乳糖苷酶染色液B    1ml
C0602-5    β-半乳糖苷酶染色液C    100ml
－    說明書    1份
保存條件：
      -20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。
細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒注意事項：
      β-半乳糖苷酶染色固定液對人體有毒、有腐蝕性，操作時請?zhí)貏e小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
      X-Gal溶液在-20℃或4℃保存會凍結(jié)，室溫或37℃水浴2-5分鐘并適當(dāng)搖動即可*融解。
      細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行染色反應(yīng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值，而導(dǎo)致染色失敗。
      試劑解凍后或使用前如果有沉淀，必須在使用前確保沉淀全部溶解。β-半乳糖苷酶染色液B剛從試劑盒中取出時，管底可能存在少量沉淀，屬正?，F(xiàn)象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解，并須確保在全部溶解后使用。配制染色工作液時，也可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會*溶解，且須確保全部溶解后才能使用。
      使用96孔板等多孔板進行檢測時，如果孵育過夜容易產(chǎn)生所謂的“邊緣效應(yīng)”(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界zui直接接觸，易受外界環(huán)境影響，其中zui明顯的是四周細(xì)胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應(yīng)。邊緣效應(yīng)會導(dǎo)致細(xì)胞生長不均勻、細(xì)胞分布不均一、培養(yǎng)液體積不*、培養(yǎng)液中相關(guān)成分的濃度、pH值不*。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應(yīng)：避免孵育過長時間，以避免蒸發(fā)等帶來的邊緣效應(yīng)；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當(dāng)溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當(dāng)溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋；在實驗設(shè)計時，實驗樣品進行隨機分配，不要將某一組樣品固定放在某個位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差。
      需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。