谷胱甘肽過氧化物酶檢測(cè)試劑盒

谷胱甘肽過氧化物酶檢測(cè)試劑盒(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit)是一種簡(jiǎn)單易行的通過紫外比色來檢測(cè)細(xì)胞、組織或其它樣品中谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase)活性的試劑盒。絕大部分細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽過氧化物酶都是含硒的，且硒為該酶的活性中性組成部分。細(xì)胞內(nèi)也有很少量的不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶存在。本試劑盒檢測(cè)的是zui常見的含硒的谷胱甘肽過氧化物酶。
      本試劑盒如果和總谷胱甘肽過氧化物酶檢測(cè)試劑盒(S0058)配合使用，可以定量檢測(cè)出樣品中不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶。
      谷胱甘肽過氧化物酶可以清除活細(xì)胞內(nèi)過氧化物，在保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷過程中起著關(guān)鍵作用 。細(xì)胞內(nèi)的脂類容易和自由基發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生脂類過氧化物。谷胱甘肽過氧化物酶可以利用還原型谷胱甘肽(GSH)還原脂類過氧化物，從而消除自由基的毒害作用。
      酶幾乎在所有組織中都有分布。在一些病理狀況下谷胱甘肽過氧化物酶的活力會(huì)發(fā)生明顯上調(diào)或下調(diào)。
      谷胱甘肽過氧化物酶可以利用還原型谷胱甘肽(GSH)催化過氧化氫以及許多有機(jī)過氧化物，產(chǎn)生水或有機(jī)醇。如果以過氧化氫為底物進(jìn)行檢測(cè)，則同樣可以分解過氧化氫的過氧化氫酶(Catalase)的酶活性會(huì)干擾谷胱甘肽過氧化物酶的測(cè)定。本試劑盒利用了一種間接測(cè)定的方法。谷胱甘肽過氧化物酶可以催化GSH產(chǎn)生GSSG，而谷胱甘肽還原酶可以利用NADPH催化GSSG產(chǎn)生GSH，通過檢測(cè)NADPH的減少量就可以計(jì)算出谷胱甘肽過氧化物酶的活力水平。在上述反應(yīng)中，谷胱甘肽過氧化物酶是整個(gè)反應(yīng)體系的限速步驟，因此NADPH的減少量和谷胱甘肽過氧化物酶的活力線性相關(guān)。
      本試劑盒利用了如下的反應(yīng)原理，GPx為谷胱甘肽過氧化物酶，GR為谷胱甘肽還原酶，R-OOH為過氧化物。

      提供的有機(jī)過氧化物試劑(t-Bu-OOH)在沒有谷胱甘肽過氧化物酶存在的情況下不會(huì)和GSH產(chǎn)生反應(yīng)，也不會(huì)被細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫酶催化而分解。因而可以較為特異地檢測(cè)出谷胱甘肽過氧化物酶的活力。
      由于t-Bu-OOH不能被不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶所催化，所以本試劑盒可以比較特異地定量檢測(cè)zui常見的含硒的谷胱甘肽過氧化物酶。
      可檢測(cè)組織勻漿產(chǎn)物、細(xì)胞裂解產(chǎn)物等樣品中谷胱甘肽過氧化物酶的活性。一個(gè)試劑盒可進(jìn)行100次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)    產(chǎn)品名稱    包裝
S0056-1    樣品勻漿液    100ml
S0056-2    谷胱甘肽過氧化物酶檢測(cè)緩沖液    50ml
S0056-3    谷胱甘肽還原酶    160μl
S0056-4    NADPH    15mg
S0056-5    還原型谷胱甘肽(GSH)    14mg
S0056-6    過氧化物試劑(t-Bu-OOH)    200μl
—    說明書    1份
保存條件：
       -20℃保存，一年有效。NADPH溶解后宜-70℃保存，4℃可以保存一天，-20℃保存一周后NADPH會(huì)減少10%以上。GSH在配制成溶液后，適當(dāng)分裝，-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
      本試劑盒檢測(cè)時(shí)牽涉到氧化還原反應(yīng)，所有氧化劑或還原劑都會(huì)干擾本試劑盒的測(cè)定。如果在樣品中的還原劑無法避免，例如DTT、巰基乙醇等，則這些還原劑的總濃度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。
      常用的Triton X-100、Tween 20等去垢劑都含有較高水平的過氧化物，會(huì)影響本試劑盒的測(cè)定。如果必須使用這些去垢劑，使用純度較高并注明含較低過氧化物的去垢劑。
      為消除樣品中可能含有的可以消耗NADPH的酶的干擾，可以檢測(cè)不加過氧化物試劑的樣品作為對(duì)照。
      樣品可以立即測(cè)定，也可以-70℃凍存待以后測(cè)定。
      一定要嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)的溫度，否則會(huì)引起較多誤差。
      NADPH不太穩(wěn)定，要嚴(yán)格按照后續(xù)說明操作，謹(jǐn)防失活。
      僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。