AB熒光桃紅染色法粘多糖染色試劑盒

AB熒光桃紅染色法粘多糖染色試劑盒研究真核基因的Z基礎(chǔ)的工作之一就是確定其轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)，目前Z通用的方 法是 5′-RACE 法，RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）是 Frohman 發(fā)明的、通過 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技術(shù)

研究真核基因的zui基礎(chǔ)的工作之一就是確定其轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)，目前zui通用的方 法是 5′-RACE 法，RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）是 Frohman 發(fā)明的、通過 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技術(shù)，它在不建立 cDNA 文庫的前提下， 利用已知 cDNA 序列設(shè)計(jì)引物，通過往兩端延伸和擴(kuò)增獲得其 5′-端序列。本試劑盒 就是根據(jù) 5′-RACE 原理而開發(fā)，
AB熒光桃紅染色法粘多糖染色試劑盒具有下列特點(diǎn)： 1. 即開即用，客戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種材料。
2. 反應(yīng)條件經(jīng)過精心優(yōu)化，包括使用無 RNase H 活性的 MMLV 和優(yōu)化的引物。
AB熒光桃紅染色法粘多糖染色試劑盒的原理如下圖：

自備試劑：Poly(A) RNA（或總 RNA）、基因?qū)Ｒ恍砸?A、B、C、75%乙醇。
注意：自備的 基因?qū)Ｒ恍砸?A，B，C 的相對(duì)位置應(yīng)該跟本手冊(cè)產(chǎn)品介紹中的示意圖*。 運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存、有效期一年。

5’RACE試劑盒使用方法
1. 變性模板 RNA：將 1 μg mRNA 或 5 μg 總 RNA 加入到一個(gè) RNase-free 的 PCR 管中，補(bǔ) RNase-Free 水到 9 μL，65℃保溫 5 分鐘后短暫離心，立即放 冰上待用。如果 RNA 濃度偏低，體積超過 9 μL,可以使用本公司的核酸濃縮劑 （需另購,產(chǎn)品編號(hào)為 110801-30）濃縮到所需的體積。
2. 設(shè)置 RT 反應(yīng)（用戶可以根據(jù)需要設(shè)陰性對(duì)照）：在上步的含變性后的 RNA 模 板的 PCR 管中，按順序加入：
3. 37℃保溫 60 分鐘， 42℃保溫 30 分鐘， 50℃保溫 10 分鐘，zui后 75℃保溫 10 分鐘使逆轉(zhuǎn)錄酶變性。短暫離心 5 秒后待用。
4. 在 PCR 管中加入 40 μL 微量核酸沉淀劑（本產(chǎn)品含不溶的核酸助沉劑，用前 需要充分搖勻再取用），震蕩混勻。
5. 室溫12000 rpm離心15分鐘，小心吸棄上清。此步沉淀可以去除多余的dNTP。
6. 加入 1mL 自備 75%乙醇，室溫 12000 rpm 離心 5 分鐘，小心吸棄上清。
7. 短暫離心數(shù)秒，小心吸棄殘留液體后，稍微晾干后加入 20 μL RNase-free 水， 充分吹打溶解，得到 cDNA 溶液待用。注意：為保證加尾效率，溶解 cDNA 的 RNase-free 水zui不要超過 20 μL。
8. 在兩個(gè)塑料離心管中按下表設(shè)置加尾反應(yīng)（強(qiáng)烈建議做一組加尾陰性對(duì)照管）
9. 37℃保溫 15 分鐘進(jìn)行加尾反應(yīng)，然后 75℃保溫 3 分鐘滅活末端轉(zhuǎn)移酶。 10. 分別加入 0.5 mL RNase-free 水稀釋樣品管和對(duì)照管中的加尾反應(yīng)產(chǎn)物。此稀 釋液將作為 PCR 的模板。 11. *輪 PCR：按下表分別使用不同體積的樣品管稀釋液和對(duì)照管稀釋液做模板 設(shè)置 PCR 反應(yīng)（單位：μL，下表只列出以樣品管稀釋液為模板的反應(yīng)）。
相關(guān)產(chǎn)品如下：

T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

Taylor法革蘭氏染色試劑盒

包涵體大量純化試劑盒

包涵體微量純化試劑盒

包涵體中量純化試劑盒

鼻病毒PCR檢測(cè)試劑盒

布魯氏菌核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）

超快蛋白銀染試劑盒

超敏型BCA法蛋白定量試劑盒

動(dòng)植物膜蛋白微量制備試劑盒

端粒酶重復(fù)片段擴(kuò)增（TRAP）試劑盒

動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒

對(duì)蝦白斑病毒熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒

非變性法蛋白沉淀試劑盒

非洲豬瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒

肺炎支原體熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒（染料法）

副結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

弓形蟲PCR檢測(cè)試劑盒

鉤狀螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒

即用型PCR試劑盒3.0（1 mL），含染料(2×Taq MasterMix)

即用型PCR試劑盒3.0，含染料

即用型高保真PCR試劑盒

即用型熱啟動(dòng)PCR試劑盒

即用型熒光定量PCR試劑盒（1mL）

加A試劑盒

加T試劑盒

莢膜染色試劑盒

酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒

結(jié)核桿菌熒光定量PCR試劑盒

口蹄疫病毒O亞型RT-PCR檢測(cè)試劑盒

兩管式RT-PCR試劑盒（MMLV-Taq）

棉花內(nèi)源基因核酸PCR檢測(cè)試劑盒

免DNA提取PCR試劑盒