傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒

傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒技術概論
聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫(yī)學領域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑。
PCR反應體系與反應條件
標準的PCR反應體系：
　　　10×擴增緩沖液 　 10ul
　　　4種dNTP混合物 　 各200umol/L
　　　引物 　　　　　 各10～100pmol　
　　　模板DNA 　　　 　 0.1～2ug　
　 　 Taq DNA聚合酶 　 2.5u　
　　　Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L
　　　加雙或三蒸水至　 100ul
PCR反應五要素： 參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
　　引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
設計引物應遵循以下原則：
　　①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
　?、谝飻U增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
　?、垡飰A基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
　?、鼙苊庖飪炔砍霈F(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3’端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
　?、菀?’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
　?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點，被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處。
　?、咭锏奶禺愋裕阂飸c核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒使用及效果

CR反應特點
(1) 特異性強

PCR反應的特異性決定因素為：
　　　①引物與模板DNA特異正確的結合；
　　?、趬A基配對原則；
　　　③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
　　?、馨谢虻奶禺愋耘c保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論

聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫(yī)學領域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑。
組織等粗制的DNA擴增檢測。

對照試驗
　1.陽性對照:在建立PCR反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照，它是PCR反應是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。陽性對照要選擇擴增度中等、重復性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標本，如以重組質粒為陽性對照，其含量宜低不宜高(100個拷貝以下)，但陽性對照尤其是重組質粒及高濃度陽性標本，其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大。因而當某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定，檢驗人員心中有數(shù)時，在以后的實驗中可免設陽性對照。
　2.陰性對照:每次PCR實驗務必做陰性對照。它包括①標本對照:被檢的標本是血清就用鑒定后的正常血清作對照;被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞作對照。②試劑對照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進行PCR擴增，以監(jiān)測試劑是否污染。
　3.重復性試驗
4.選擇不同區(qū)域的引物進行PCR擴增
防止污染的方法H5N1禽流感熒光定量PCR檢測試劑盒（不含反轉錄）11-110（即11-AI-H5N1）50 T990元
miRNA熒光定量RT-PCR檢測試劑盒131042-2525次2997元點擊下載 131042miRNA熒光定量RT-PCR檢測試劑盒使用手冊V1點0
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多瘤病毒PCR檢測試劑盒11-1060
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肺耐藥蛋白基因PCR檢測試劑盒11-1110
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風疹病毒PCR檢測試劑盒11-1150
麩質Gluten基因PCR檢測試劑盒11-1160
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庚型肝炎病毒PCR檢測試劑盒11-1250
弓形蟲PCR檢測試劑盒11-126050次1490元點擊下載 11-1260弓形蟲pcr檢測試劑盒使用手冊v1
鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒11-1270
鉤狀螺旋體PCR檢測試劑盒11-170（即11-LI）50次1490元點擊下載 11-170 鉤狀螺旋體PCR試劑盒
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霍亂弧菌熒光PCR檢測試劑盒11-270（即11-VC）50 T1990元
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雞毒支原體PCR檢測試劑盒11-149050次1490元點擊下載 11-1490 雞毒支原體PCR檢測試劑盒使用手冊v1點0
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脊髓灰質炎病毒1型PCR檢測試劑盒11-1520
脊髓灰質炎病毒2型PCR檢測試劑盒11-1530
脊髓灰質炎病毒3型PCR檢測試劑盒11-1540