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人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1Elisa試劑盒是一種用于特異性地超高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿、細胞或組織裂解液、或細胞培養(yǎng)上清液中的胰島素的ELISA試劑盒。zui少5μl大鼠血清即可檢測，5μl普通大鼠血清可以導致吸光度比本底增加約0.1(不同大鼠略有不同)，使用10μl大鼠血清檢測可以獲得非常理想的檢測數(shù)據(jù)。本試劑盒不僅適用于常規(guī)的大鼠血清胰島素水平檢測，還特別適合于糖耐量實驗(Glucose tolerance test, GTT)時測定每個時間點的血清胰島素水平。
人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1Elisa試劑盒檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。zui小檢出量為0.1ng/ml，10μl 0.1ng/ml大鼠胰島素標準品可以導致吸光度比本底增加約0.07。與IGF-I、IGF-II、大鼠C肽、大鼠C肽均沒有交叉反應，與豬胰島素、綿羊胰島素、小鼠胰島素、牛胰島素及人胰島素分別有628%、256%、75%、110%和195%交叉反應。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
Insulin即胰島素，是由胰臟內(nèi)的胰島β細胞分泌產(chǎn)生的，分子量約5.8kDa。胰島β細胞首先合成含有信號肽(24個氨基酸殘基)的前胰島素原(preproinsulin)，該信號肽將前胰島素原定位到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。前胰島素原的信號肽被剪切后形成胰島素原(proinsulin)，并被釋放到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，隨后在其中形成3個二硫鍵并正確折疊。隨后胰島素原進入高爾基體，經(jīng)蛋白水解酶的作用，生成C肽(C-peptide)和由A鏈和B鏈通過兩個二硫鍵連接起來的胰島素。1923年和1958年，胰島素的發(fā)現(xiàn)和其氨基酸序列測定都獲得了諾貝爾獎。1965年，中國科學家實現(xiàn)人工全合成結(jié)晶牛胰島素，也是生命科學*的重要成果。胰島素的分泌主要受血糖水平的調(diào)控，血液中葡萄糖水平升高時，更多的葡萄糖通過GLUT2進入β細胞，并產(chǎn)生更多的ATP，ATP水平的升高導致ATP敏感的SUR1/Kir6.2鉀離子通道關(guān)閉，使細胞內(nèi)鉀離子集聚，從而引起細胞膜去極化，引發(fā)電壓門(voltage-gated)鈣離子通道打開，細胞內(nèi)鈣離子濃度升高，zui終導致胰島素的分泌。胰島素的分泌分為兩個時段，*個時段通常受血糖調(diào)控，持續(xù)時間約為10分鐘；第二個時段是一個比較持續(xù)和緩慢的過程，通常分泌的高峰出現(xiàn)在*個時段后的2-3小時，并且不受血糖水平影響。胰島素的分泌不僅受葡萄糖調(diào)控，也受乳糖、核糖、精氨酸和亮氨酸等氨基酸、副交感神經(jīng)釋放的乙酰膽堿、腸道分泌的腸促胰島素(incretin)例如glucagon-like peptide-1 (GLP-1)和glucose-dependent insulinotropic peptide (GIP)、膽囊收縮素(cholecystokinin)、促胰島素分泌的磺脲(sulfonylruea)類藥物等的影響。胰島素的釋放可被緊張時釋放的去甲腎上腺素(norepinephrine)、交感神經(jīng)釋放的兒茶酚胺(catecholamine)、以及胰高血糖素等所抑制。
胰島素的主要生物學功能是降低血糖，促進合成代謝。胰島素可以促進肝臟、肌肉、脂肪等器官和組織的葡萄糖攝入，抑制糖異生(gluconeogenesis)，促進糖原合成等。同時胰島素也可促進脂質(zhì)合成和儲存，抑制脂質(zhì)分解，促進蛋白合成并抑制蛋白降解，促進DNA和RNA合成，抑制自噬(autophagy)。胰島素分泌不足或胰島素敏感性下降，導致不能有效降低血糖，是糖尿病發(fā)生的主要原因。胰島素分泌過量時，會導致低血糖，甚至出現(xiàn)驚厥、昏迷和休克。
采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當加入辣根過氧化物酶標記靶蛋白抗體后，辣根過氧化物酶標記靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復合物。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
PI606-1 大鼠Insulin抗體預包被板 8孔×12條
PI606-2 標準品稀釋液 10ml
PI606-3 大鼠Insulin標準品 2-4瓶
PI606-4 辣根過氧化物酶標記大鼠Insulin抗體 10ml
PI606-5 洗滌液(20X) 30ml
PI606-6 TMB溶液 10ml
PI606-7 終止液 5ml
PI606-8 封板膜(透明) 2張
PI606-9 封板膜(白色) 2張
— 說明書 1份
保存條件：
除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB對人體有刺激性，請注意適當防護。
如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍色，應該停止使用。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致zui終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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