人抗可提取核抗原抗體（ENA-Ab）Elisa試劑盒

人抗可提取核抗原抗體（ENA-Ab）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結合，形成夾心的免疫復合物

人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)Elisa試劑盒使用說明書  

規(guī)格 96t

目    的：人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)Elisa試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)含量。檢測范圍：

1.5ng/L -40ng/L
實驗原理：
人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)Elisa試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)， 再與 HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度
（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)濃度。
試劑盒組成：
Reagent    Quantity
酶標包被板    12well×8strips
標準品:80 ng/L    1×0.5ml
標準品稀釋液    1×1.5ml
酶標試劑    1×6ml
樣品稀釋液    1×6ml
顯色劑 A 液    1×6ml
顯色劑 B 液    1×6ml
終止液    1×6ml
30 倍濃縮洗滌液    1×20ml×30flod
說明書    1
封板膜    2
密封袋    1

樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固    10-20    分鐘，離心    20    分鐘左右（2000-3000    轉/分） 。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇        EDTA    或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合    10-20    分鐘后， 離心 20    分鐘左右（2000-3000    轉/分）        。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成， 應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心    20    分鐘左右（2000-3000    轉/分）    。仔細收集上清， 保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20  分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100   萬/ml   左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的    PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?nbsp;       2-8℃的溫度。加入一定量的    PBS（PH7.4）    ，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心    20    分鐘左右（2000-3000    轉/分）    。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能  馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7.不能檢測含    NaN3    的樣品，因    NaN3    抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)Elisa試劑盒操作步驟：
1.標準品：其濃度為 80 ng/L(貯液)。先將其稀釋為 80 ng/L(標準曲線zui高濃度)后，再準備
5 個稀釋標準品的 EP  管，每個 EP  管中加入 150μL  的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成 80 ng/L, 40 ng/L,20 ng/L, 10 ng/L,5 ng/L, 2.5 ng/L,，標準品稀釋液(0 ng/L)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液

 

Tube    0    1    2    3    4    5
ng/L    80 ng/L    40 ng/L    20 ng/L    10 ng/L    5 ng/L    2.5 ng/L

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μ l，然后再加待測樣品 10 μ l（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁， 輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置    37℃溫育    30    分鐘。
4.配液：將    30    倍濃縮洗滌液用蒸餾水    30    倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置    30    秒后棄去， 如此重復    5    次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑    50μ l，空白孔除外。
7.溫育：操作同    3。
8.洗滌：操作同    5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑    A50μ l，再加入顯色劑    B50μ l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15    分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μ l，終止反應（此時藍色立轉黃色）    。
11.測定：以空白空調零，450nm    波長依序測量各孔的吸光度（OD    值）    。    測定應

在加終止液后    15    分鐘以內進行。

注意事項：
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡    15-30    分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間  zui控制在    5    分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，zui做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD  值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n   倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。

計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD    值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的    OD     值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋 倍數；或用標準物的濃度與    OD        值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的    OD    值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數，即為樣品的實際濃度。

人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)Elisa試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數    R    值為    0.990    以上。
2.批內與批見應分別小于    9%和    11%
3.保存條件及有效期：
a.試劑盒保存：2-8℃。
b.有效期：6    個月