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使用說明
規(guī)格 96t
目 的：人蛋白酶3抗體(PR3Ab)Elisa試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)含量。檢測范圍：
1.5ng/L -40ng/L
實(shí)驗(yàn)原理：
人蛋白酶3抗體(PR3Ab)Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)， 再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度
（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人丙肝病毒 IgM 抗體(HCV IgM)濃度。
試劑盒組成：
Reagent Quantity
酶標(biāo)包被板 12well×8strips
標(biāo)準(zhǔn)品:80 ng/L 1×0.5ml
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1×1.5ml
酶標(biāo)試劑 1×6ml
樣品稀釋液 1×6ml
顯色劑 A 液 1×6ml
顯色劑 B 液 1×6ml
終止液 1×6ml
30 倍濃縮洗滌液 1×20ml×30flod
說明書 1
封板膜 2
密封袋 1
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后， 離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成， 應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清， 保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
人蛋白酶3抗體(PR3Ab)Elisa試劑盒操作步驟：
1.標(biāo)準(zhǔn)品：其濃度為 80 ng/L(貯液)。先將其稀釋為 80 ng/L(標(biāo)準(zhǔn)曲線zui高濃度)后，再準(zhǔn)備
5 個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的 EP 管，每個 EP 管中加入 150μL 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成 80 ng/L, 40 ng/L,20 ng/L, 10 ng/L,5 ng/L, 2.5 ng/L,，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0 ng/L)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
Tube 0 1 2 3 4 5
ng/L 80 ng/L 40 ng/L 20 ng/L 10 ng/L 5 ng/L 2.5 ng/L
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μ l，然后再加待測樣品 10 μ l（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁， 輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去， 如此重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μ l，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μ l，再加入顯色劑 B50μ l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μ l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)
在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 zui控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，zui做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
人蛋白酶3抗體(PR3Ab)Elisa試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.990 以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和 11%
3.保存條件及有效期：
a.試劑盒保存：2-8℃。
b.有效期：6 個月
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