人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體（SDA）Elisa試劑盒

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體（SDA）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)Elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

規(guī)格：48次、96次

使用目的：血清、血漿及相關(guān)液體樣本

標(biāo)本要求
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。

固相載體
固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)?？勺鱁LISA中載體的材料很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用，于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測抗體時(shí)空白值較大。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割、價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測定方法選出一個(gè)典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測定，然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大這種載體就是這一ELISA測定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)Elisa試劑盒陽性對照品和陰性對照品

陽性對照品(positive control)和陰性對照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控
制品，同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對照，因此對照品，特別是陽性對照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測標(biāo)本的組成相*。以人血清為標(biāo)本的測定，對照品zui也為人血清，因?yàn)檎Ｈ搜逶诟鞣NELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底。由于大量正常人血清較難得到，國外試劑盒中的對照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料，即在血漿中加入鈣離子，使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固，除去凝塊后所得的液體，其組成與血清相似。陰性對照品須先行檢測，確定其中不含待測物質(zhì)。例如HBsAg檢測的陰性對照品中不可含HBsAg，zui抗HBs也是陰性。陽性對照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，其中加入一定量的待檢物質(zhì)，此量zui在試劑說明書中標(biāo)明。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱，在測定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較，可對標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估計(jì)。國外檢測HBsAg的ELISA試劑盒檢測敏感度約為0.5ng/ml，陽性對照品中含量約為10ng/ml。在對照品中一般加入抗生素和防腐劑，以利保存。

參考標(biāo)準(zhǔn)品
定量測定的ELISA試劑盒應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)包括覆蓋可檢測范圍的4-6個(gè)濃度，一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中。

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)Elisa試劑盒樣本前處理簡介

一）樣本前處理的目的、內(nèi)容、重要性

1、目的

樣本處理的zui終目的是將待測組分從樣本中分離出來，并達(dá)到能夠檢測的狀態(tài)。

2、內(nèi)容

提取、凈化是主要的兩個(gè)內(nèi)容，也有的需要進(jìn)行濃縮甚至衍生化。

3、重要性

      據(jù)統(tǒng)計(jì)，人們常常將60%的時(shí)間花在樣品前處理上。這不但不符合高效率的要求，而且煩瑣的傳統(tǒng)樣品處理方法也直接影響到zui后的分析結(jié)果。

二）殘留分析的樣品種類

    組織（肌肉、肝臟、魚、蝦等）、蜂蜜、蜂王漿、花粉、飼料及其原料、腸衣、熟食、尿樣（豬尿、牛尿、羊尿等）、血清（牛血清、豬血清、雞血清等）、牛奶及奶粉、雞蛋、糞便等。

三）樣本前處理操作一般步驟

1、各種溶液配制

在實(shí)驗(yàn)開始前按照說明書的要求配制出各種實(shí)驗(yàn)需要的溶液，實(shí)驗(yàn)室已有的的溶液也應(yīng)考慮溶液的配制日期以及有效期

2、樣本稱量/量取前的處理

有的樣本是冷凍保存，有的樣本在較低溫度時(shí)粘度較大在樣本且變得不均一，它們稱量/量取前必須解凍或加熱，夏天采用放置室內(nèi)解凍即可，冬天可以是防水的溫水浴解凍，或24/37度溫箱解凍，也可以采用暖氣片解凍，但是無論是什么樣的方式在解凍完成以后必須立即轉(zhuǎn)到室溫環(huán)境中來，以免變質(zhì)，值得一提的是某些藥物的實(shí)驗(yàn)樣本的解凍方式必須使用室溫解凍，其他的解凍方式均對結(jié)果都有很大的影響

3、樣本稱量/量取

按照說明書規(guī)定的量進(jìn)行稱量/量取，對于外來復(fù)核的樣本稱量/量取應(yīng)更加的精確，當(dāng)稱量的量很少的情況下可由一般的天平轉(zhuǎn)到分析天平去稱量，天平也要按時(shí)進(jìn)行校正部分樣本采用量取的方式取樣，在量取前必須保證量取容器的準(zhǔn)確行；以保證樣本量準(zhǔn)確

4、樣本提取液加入

按照說明書給定的量和試劑/溶液的種類加入到樣本中，量少的情況下可以用移液器進(jìn)行轉(zhuǎn)移，當(dāng)需要的試劑/溶液量較大的情況下必須用移液管。

注:需要做添加高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的樣本,在加入提取液之前加入高濃度標(biāo)準(zhǔn)品

5、震/振搖

該步驟有兩種方式，一種為長時(shí)間的使用震蕩器上震蕩，該方法可定時(shí)定量，但對于某些實(shí)驗(yàn)不適用，另一種為較強(qiáng)烈的振蕩，可用渦動(dòng)儀強(qiáng)烈渦動(dòng)，也可以人為的上下振蕩。不同的實(shí)驗(yàn)對時(shí)間的要求也不同，要按照說明書進(jìn)行

6、離心

離心有三個(gè)影響因素，即為離心力、時(shí)間、溫度，需要設(shè)定的參數(shù)就是三個(gè)參數(shù)，具體的設(shè)定方式因離心機(jī)不同而有一定的差異，沒有條件的情況下要保證時(shí)間和離心機(jī)轉(zhuǎn)度。

7、取液

１）取上層：這是zui為常見和zui簡單的取液方式，僅僅需要按量取就可以

２）取中間層：zui不常見的取液方式，一般情況下是去掉全部上層再吸取中間層，對于一些經(jīng)驗(yàn)較為豐富的實(shí)驗(yàn)員在處理部分實(shí)驗(yàn)時(shí)可以直接突破上層取中間層

３）取下層：較4是像取中間那樣進(jìn)行，值得注意的是，所有取液方式都有可能遇到取液時(shí)液體的量越取越體積越大，甚至吸到移液器內(nèi)，對于這樣的情況在取液時(shí)注意看液體的體積達(dá)到量就不繼續(xù)吸就可以了

7、吹干

吹干的三個(gè)影響因素為氣體、溫度、加熱方式

氣體：較為理想的吹干氣體為氮?dú)猓鲇诔杀締栴}多數(shù)小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室一般采用空氣吹干，

溫度：根據(jù)藥物與提取溶劑的物理性質(zhì)選擇一個(gè)合適的溫度，一般在50到60℃之間

加熱方式：一般有兩種方式，分為水浴方式和干浴

8、復(fù)溶

吹干以后加入復(fù)溶液將藥物溶解出來的過程，加速溶解的方式可為渦動(dòng)溶解和超聲溶解，時(shí)間時(shí)情況而定，一般僅使用渦動(dòng)溶解

9、樣本檢測

       該步驟的具體操作見試劑盒說明書中的檢測步驟。

四）前處理相關(guān)試驗(yàn)術(shù)語及定義

1、陰性和陽性

陰性：即樣本中不含被檢測物質(zhì)。

陽性：樣本中含有被檢測物質(zhì)。

2、假陰性與假陽性

假陰性：因某些因素的影響導(dǎo)致陽性樣本檢測結(jié)果為陰性的現(xiàn)象。

假陽性：因某些因素的影響導(dǎo)致陰性樣本檢測結(jié)果為陽性的現(xiàn)象。

3、靈敏度：試劑盒方法能檢測到待測藥物的zui底濃度。

4、準(zhǔn)確度：指測定值(平均值)與真值的接近程度，表示分析結(jié)果的真實(shí)性。通常用添加回收率來表示：

         回收率=(測定值-空白值)/添加量 ×100％

5、精密度：指用某種方法重復(fù)測定同一均質(zhì)樣品測定值彼此接近程度，表示分析結(jié)果的重復(fù)性，常用變異系數(shù)表示。

6、檢測限（LOD  limit of detection）：檢測限指分析方法能夠從樣本的背景信號中檢測出待測物存在時(shí)所需的zui低濃度。LOD反映了分析方法整體的靈敏度效能指標(biāo)。一般對分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度、回收率）不作要求，一般要求殘留分析方法LOD≦0.1MRL    LOD=B+2SD或B+3SD

7、定量限（LOQ  limit of quantitation）：指分析方法能夠?qū)悠分械拇郎y物進(jìn)行定量測定的zui低濃度，用于定量方法的驗(yàn)證。

8、殘留檢測限（ＭＲＬ）

規(guī)定允許食品中藥物zui高殘留量，很多情況下各國規(guī)定的ＭＲＬ值之間有一定的差異，多數(shù)情況下我國規(guī)定的ＭＲＬ值較日本、歐盟、美國的高一些。

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)Elisa試劑盒基本配套儀器

 1、微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm

2、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置

3、均質(zhì)器

4、振蕩器

5、渦旋儀

6、離心機(jī)

7、天平：感量0.01g

8、微量移液器：單道 20ml～200ml、100ml～1000ml

多道 250ml

9、超聲儀

10、恒溫培養(yǎng)箱/生化培養(yǎng)箱

11、冰箱

12、洗板機(jī)（可選）

13、磁力攪拌器

 

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用。

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月