人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白（PTHrP）Elisa試劑盒

人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白（PTHrP）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測(cè)樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見(jiàn)圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物

人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)Elisa試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
實(shí)驗(yàn)材料    抗原血清
試劑、試劑盒    碳酸鹽包被緩沖液PBSTBSA
儀器、耗材    96孔酶標(biāo)板4℃冰箱恒溫培養(yǎng)箱分光光度計(jì)
人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟    
一、包被抗原
 
1. 用50mM 的碳酸鹽包被緩沖液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原濃度為10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶標(biāo)板，4℃放置過(guò)夜。
2. 第二天棄去包被液后，用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時(shí)。
3. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對(duì)照樣品，37℃孵育2 小時(shí)。
4. PBST 洗滌5 次后，加入100μl 稀釋后的HRP 標(biāo)記的二抗，37℃孵育1 小時(shí)。
5. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取A405 吸收值。
 
二、包被細(xì)胞
 
1. 人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)Elisa試劑盒在96 孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞數(shù)為1 x 104 cells/well，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
2. 第二天用PBS 洗滌培養(yǎng)板2-3 次。
3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀釋?zhuān)? 室溫下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗滌培養(yǎng)板3 次，并晾干，儲(chǔ)藏在2-8℃?zhèn)溆谩?br />5. 用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時(shí)。
6. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對(duì)照樣品，37℃孵育2 小時(shí)。
7. PBST 洗滌5 次后，加入100 μl 稀釋后的HRP 標(biāo)記的二抗,37℃孵育1 小時(shí)。
8. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取A405 吸收值。50mM 的碳酸鹽包被緩沖液：0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸餾水稀釋至100 ml。                                                                                                                   

ABTS 作為底物進(jìn)行顯色反應(yīng)(10ml)：
² 0.2M Na2HPO4 2.4ml
² 0.1M 檸檬酸2.6ml
² ddH2O 5ml
² ABTS 5mg
² H2O2(30%) 4 ul（用前加入）