大鼠血小板生成素（TPO）Elisa試劑盒

產(chǎn)品相關(guān)參數(shù)
產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T
產(chǎn)品有效期：zui長6個月，儲存條件2-8℃
產(chǎn)品特異性：大鼠血小板生成素(TPO)Elisa試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
產(chǎn)品實驗設(shè)備：酶標儀， 37℃恒溫箱，自動洗板機，可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭，蒸餾水，干凈的試管，容量瓶等。
大鼠血小板生成素(TPO)Elisa試劑盒1.產(chǎn)品具有高效性、靈敏性、特異性等特點
2.產(chǎn)品的穩(wěn)定性和可靠性，檢測種屬有人，動物，植物，金標ELISA試劑盒等
3.產(chǎn)品吸附均勻，吸附性能好，空白值低，孔底透明度高
4.產(chǎn)品適用于 血清、血漿、體液、尿液等各種樣本
5.產(chǎn)品質(zhì)量保證，由于產(chǎn)品本身質(zhì)量問題使實驗結(jié)果不理想，可以換貨或退貨
6. 公司與順豐快遞密切合作，保證了產(chǎn)品時效性與安全性
7.公司提供7*24小時，在實驗過程中遇到的任何問題我司高級技術(shù)人員會為你提供技術(shù)指導

【適用范圍】： 
1．適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型； 
2．可檢測動物類型豐富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、雞、蝦、魚等 
3．可檢測指標齊全：白介素，干擾素，血管緊張素，肺炎衣原體，趨化因子、生長因子基質(zhì)金屬蛋白酶、炎癥因子、血管生成素 等等 指標 

產(chǎn)品圖片
 

聲明 
1. 限于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平，尚不能對所有原料進行全面的鑒定分析，本產(chǎn)品可能存
在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。
2. zui終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請
務(wù)必準備充足的待測樣品。
3. 只有全部使用試劑盒內(nèi)的試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴
格遵守本實驗說明才會得到*的檢測結(jié)果。
4. 有效期：6 個月。
【實驗準備】：
1. ELISA試劑盒及待測樣本
2. 酶標儀(450nm波長濾光片) 
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭
4. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水 
5. 吸水紙
 
【標本要求】：
1.血清： 
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 
2.血漿： 
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。 
3.尿液： 
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。 
4.細胞培養(yǎng)上清： 
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。 
5.培養(yǎng)細胞: 
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 
6.組織標本: 
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 
7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融 
8.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 

【大鼠血小板生成素(TPO)Elisa試劑盒操作步驟】：
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，依次進行稀釋數(shù)倍。
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
配液：將30倍（48T 的20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
【計算結(jié)果】：
      以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 
 
【操作事項】：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.  加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
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Caspase家族活性的檢測    Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。在正常狀態(tài)下， Caspase家族都以無活性的酶原(30～50kD)形式表達，當細胞發(fā)生凋亡時Caspase可以被蛋白酶裂解，大亞基和小亞基形成活化的Caspase 。一些Caspase活化后可以次序激活其他Caspase形成Caspase級聯(lián)反應(yīng)，促發(fā)細胞凋亡。在目前已知的14種Caspase中，Caspase-3、8和9與凋亡的關(guān)系zui為密切，在細胞凋亡中起執(zhí)行凋亡的作用。將Caspase序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團，當該底物被特定的caspase剪切后，發(fā)色基團即游離出來，可通過酶標儀或分光光度計（λ=405nm 或400nm）測定其吸光值，考察caspase的活化程度。
        
    
細胞周期及細胞增殖檢測    細胞壞死和凋亡是兩種截然不同的細胞學現(xiàn)象，二者發(fā)生的過程在形態(tài)學上有很大的區(qū)別。在細胞壞死時，細胞膜發(fā)生滲漏，細胞內(nèi)容物包括細胞器及染色質(zhì)釋放到胞外。而在細胞凋亡過程，起始階段，染色質(zhì)固縮、分離并沿核膜分布，細胞質(zhì)亦發(fā)生固縮，但細胞膜依然完整未失去選擇透性；在凋亡后期，核染色質(zhì)斷裂為大小不等的片斷，與某些細胞器如線粒體一起聚集，為反折的細胞膜包圍，后逐漸分離，形成凋亡小體。