大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒

大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

規(guī)格：48T   96T

檢 測 范 圍 ：7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 ：本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中小反芻獸疫抗體(PPRAb)含量。

標 本 要 求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Elisa試劑盒試劑及試劑配制
 1. 抗原及酶標記抗體 
①抗原： IgG 
②酶標抗抗體：羊抗鼠IgG-HRP 
2.包被液（CBS）：Na2CO3   0.8g，NaHCO3  1.46g，水溶解，定容500ml。  
3. 封閉液（3％BSA+CBS 或5％牛奶+CBS）：含3％牛血清白蛋白（BSA）：10mL CBS中加入0.3g BSA。含5％荷蘭牛奶：10mL CBS中加入0.5g牛奶 。 
4. 洗滌液（PBST 10*）：KH2PO4   4g，Na2HPO4·12H2O    58g，NaCl   160g， KCl  4g，Tween-20 10mL  加水定容2L。  
5. 洗滌液(1*PBS)： PBST：H2O=1：9 
6. 底物溶液（4甲基酰苯氨） ①TMB底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液)：稱NaAc·3H2O：1.13g，C6H8O7·H2O ：1.05g，用蒸餾水溶解，定容至1000mL，調(diào)PH=3.6。 ② TMB底物液：稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜（DMSO）中，加60 mL 甲醇，混勻，加100mL 底物緩沖液，在暗處避光攪拌2小時至溶解，4℃避光保存。 ③H2O2 底物液：取140μL過氧化氫（H2O2）加入200mL底物緩沖液混勻。 ④底物應(yīng)用液：現(xiàn)用現(xiàn)配，TMB:H2O2=1:1混勻。 
7. 終止液：2mol/L H2SO4 

四、操作步驟
 ①抗原包被過夜（12h以上）： IgG抗原，用包被液（CBS）稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜。 抗原用量：0.1μg*100N/抗原濃度 （N為板數(shù)）
②封閉：棄上清 加300μL/孔封閉液，37℃放置2h。 
③洗滌：用洗滌液洗3次 
④加一抗(待測樣品為細胞培養(yǎng)上清)：將含單克降抗體的細胞培養(yǎng)上清100μL /孔加到已包被的板上，空白培養(yǎng)基作為陰性對照，已知樣品血清（1：200稀釋于1%BSA+PBST中）作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。 測免疫效價待測樣品為小鼠血清時：采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清，3000r 10min離心。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續(xù)倍比稀釋(按照1：200開始)，100μL /孔。每個樣品平行做兩份，小鼠陰性血清或空白培養(yǎng)基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。 
⑤洗滌：用洗滌液洗5次。 
⑥加二抗（酶標抗抗體）：羊抗鼠IgG-HRP，用1%BSA+PBST l ：10000稀釋，100μL／孔， 37℃恒溫箱溫育1h。
⑦洗滌：用洗滌液洗5次， 
⑧顯色：加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔，37℃恒溫箱放置10min，顯示藍色。 
⑨終止反應(yīng)、比色：加30μL/孔H2SO4終止液．顏色變黃；用酶標儀測定450nm  630nm處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價。

相關(guān)產(chǎn)品如下：

小鼠原B細胞株    BAF3
小鼠胚胎成纖維細胞    BALB/3T3 clone A31
小鼠胚胎成纖維細胞    BALB/3T3 clone A31
小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株    bEnd.3
小鼠胰島素瘤胰島Beta細胞    Beta-TC-6
小鼠小膠質(zhì)細胞    BV2
小鼠神經(jīng)干細胞    C17.2
小鼠成肌細胞    C2C12
小鼠結(jié)腸癌細胞    CT26
小鼠結(jié)腸癌細胞    CT26.WT
小鼠胚胎干細胞    E14
小鼠淋巴瘤細胞    EL-4
小鼠飼養(yǎng)層上皮細胞    HPT-8
小鼠海馬神經(jīng)元細胞    HT22
小鼠卵巢上皮癌細胞    ID8
小鼠單核巨噬細胞    J774A.1
小鼠成纖維細胞    L929
小鼠肺癌細胞    LLC
小鼠胰腺癌細胞    LTPA
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞    MA-891
小鼠膀胱癌細胞    MB49
小鼠胚胎成骨細胞    MC3T3-E1
小鼠胚胎成纖維細胞    MEF
小鼠胚胎成纖維細胞    MEF
小鼠前胃癌細胞    MFC
小鼠肝上皮細胞    NCTC clone 1469
小鼠正常肝細胞    NCTC1469
小鼠腦神經(jīng)瘤細胞    neuro-2a
小鼠胚胎細胞    NIH/3T3
小鼠骨髓基質(zhì)細胞    OP9
小鼠畸胎瘤細胞    P19
小鼠白血病細胞    P388
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株    PT-67
小鼠單核巨噬細胞白血病細胞    RAW 264.7
小鼠腎癌細胞    RENCA
小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞    RGC-5
小鼠雜交瘤    SDOW-17
小鼠胚胎干細胞    SOX1-GFP
小鼠骨髓瘤細胞    Sp2/0