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大鼠蛋白激酶A(PKA)Elisa試劑盒

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更新時間:2024-10-26 10:03:32瀏覽次數(shù):180

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨    
大鼠蛋白激酶A(PKA)Elisa試劑盒是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體,適用多種標(biāo)本類型并節(jié)約成本。其高效、靈敏、特異的抗體與高效、靈敏、特異的抗體使實驗曲線更*。是一款可以讓您放心選購的ELISA試劑盒產(chǎn)品。

詳細(xì)介紹

大鼠蛋白激酶A(PKA)Elisa試劑盒是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

規(guī)格:48T   96T

檢 測 范 圍 :7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 :本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中小反芻獸疫抗體(PPRAb)含量。

標(biāo) 本 要 求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

大鼠蛋白激酶A(PKA)Elisa試劑盒試劑及試劑配制
 1. 抗原及酶標(biāo)記抗體 
①抗原: IgG 
②酶標(biāo)抗抗體:羊抗鼠IgG-HRP 
2.包被液(CBS):Na2CO3   0.8g,NaHCO3  1.46g,水溶解,定容500ml。  
3. 封閉液(3%BSA+CBS 或5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA。含5%荷蘭牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。 
4. 洗滌液(PBST 10*):KH2PO4   4g,Na2HPO4·12H2O    58g,NaCl   160g, KCl  4g,Tween-20 10mL  加水定容2L。  
5. 洗滌液(1*PBS): PBST:H2O=1:9 
6. 底物溶液(4甲基酰苯氨) ①TMB底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液):稱NaAc·3H2O:1.13g,C6H8O7·H2O :1.05g,用蒸餾水溶解,定容至1000mL,調(diào)PH=3.6。 ② TMB底物液:稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜(DMSO)中,加60 mL 甲醇,混勻,加100mL 底物緩沖液,在暗處避光攪拌2小時至溶解,4℃避光保存。 ③H2O2 底物液:取140μL過氧化氫(H2O2)加入200mL底物緩沖液混勻。 ④底物應(yīng)用液:現(xiàn)用現(xiàn)配,TMB:H2O2=1:1混勻。 
7. 終止液:2mol/L H2SO4 

大鼠蛋白激酶A(PKA)Elisa試劑盒操作步驟
 ①抗原包被過夜(12h以上): IgG抗原,用包被液(CBS)稀釋,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜。 抗原用量:0.1μg*100N/抗原濃度 (N為板數(shù))
②封閉:棄上清 加300μL/孔封閉液,37℃放置2h。 
③洗滌:用洗滌液洗3次 
④加一抗(待測樣品為細(xì)胞培養(yǎng)上清):將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清100μL /孔加到已包被的板上,空白培養(yǎng)基作為陰性對照,已知樣品血清(1:200稀釋于1%BSA+PBST中)作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。 測免疫效價待測樣品為小鼠血清時:采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清,3000r 10min離心。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續(xù)倍比稀釋(按照1:200開始),100μL /孔。每個樣品平行做兩份,小鼠陰性血清或空白培養(yǎng)基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。 
⑤洗滌:用洗滌液洗5次。 
⑥加二抗(酶標(biāo)抗抗體):羊抗鼠IgG-HRP,用1%BSA+PBST l :10000稀釋,100μL/孔, 37℃恒溫箱溫育1h。
⑦洗滌:用洗滌液洗5次, 
⑧顯色:加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔,37℃恒溫箱放置10min,顯示藍(lán)色。 
⑨終止反應(yīng)、比色:加30μL/孔H2SO4終止液.顏色變黃;用酶標(biāo)儀測定450nm  630nm處各孔的吸光值,陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價。

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