大腸桿菌BL21化學感受態(tài)細胞

大腸桿菌BL21化學感受態(tài)細胞是大腸桿菌 BL21（DE3）plysS 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA 的熱擊轉化。使用 pUC19 質粒檢測本產(chǎn)品，轉化效率可達 107。該菌株帶有質粒plysS，具有氯霉素抗性，此質粒含有表達 T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾 IPTG 誘導的表達

產(chǎn)品及特點

大腸桿菌BL21化學感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 BL21 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于 DNA 的化學轉化。本產(chǎn)品用作表達載體的宿主，適用于毒性蛋白的表達，適用于不是基于 T7 啟動子的表達系統(tǒng)。使用 pUC19 質粒檢測，本產(chǎn)品轉化效率可達 107。菌株基因型為：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal

規(guī)格及成分 成分 編號 包裝
本產(chǎn)品 140428 0.1 mL×10
使用手冊 1 份

 

 

運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等
使用方法 1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μL，可以根據(jù)
實際情況分裝使用。
以下實驗以 50 μL 感受態(tài)細胞為例。
2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實際情況加入適量
的 DNA，通常 100 μL 感受態(tài)細胞能夠被 1 ng 超螺旋質粒 DNA 所飽和），用移液器
輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。
3. 42℃熱擊 45 秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
4. 每個離心管中加入 450 μL 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃
搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復蘇。
5. 根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的 SOC 或 LB 固體
瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體被吸收，
倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。
大腸桿菌BL21化學感受態(tài)細胞注意事項：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的 DNA 總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；
若轉化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數(shù)較
少，可通過離心（4,000 rpm，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于
平板中。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再
涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。