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阿菲波菌屬通用PCR進(jìn)口試劑盒設(shè)置 PCR 反應(yīng)
閱讀:190 發(fā)布時(shí)間:2020-5-21阿菲波菌屬通用PCR進(jìn)口試劑盒設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40 uL 體系)
1. 在 N+2 個(gè) PCR 管中加入下列成分,下面以樣品數(shù)為 1 舉例(注意:如果一次使用DNA 釋放劑,*每個(gè)樣品設(shè)置兩個(gè)模板用量的 PCR 反應(yīng),兩個(gè)反應(yīng)的模板使用量差 10 倍,由此確定*用量,以后就用效果*的那個(gè)模板用量):
2. 輕柔混勻后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR。
3. 電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 216bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出
現(xiàn),陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,需要用通用引物(如真核生物專(zhuān)一 PCR 引物,需自備)測(cè)試是否有抑制劑或樣品是否濃度達(dá)到 PCR 的要求,如果通用引物也擴(kuò)不出來(lái),需要濃縮并再次純化 DNA 樣品,或者更換 DNA 提取方法,直到通用引物能夠擴(kuò)增出預(yù)計(jì)大小的片段。