人脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞，HAMECC細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程：

一、準(zhǔn)備工作

1.器皿的清潔、干燥和消毒；

2.培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌；

3.無菌室或超凈臺的清潔與消毒；

4.培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等等。

二、取材

在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細(xì)胞。理論上各種動物和人體組織都可用于培養(yǎng)，但幼體組織尤其是胚胎組織更易培養(yǎng)。取材時應(yīng)在無菌環(huán)境下盡快處理并培養(yǎng)。

三、培養(yǎng)

1.組織塊培養(yǎng)，直接放置于器皿底部，幾個小時后再加入培養(yǎng)基；細(xì)胞系培養(yǎng)，先行計數(shù)，按一定量接入器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞今早進(jìn)入生長狀態(tài)。

2.每隔一定時間觀察細(xì)胞生長狀況、形態(tài)、有無污染、PH值以及二氧化碳濃度等等。

3.原代細(xì)胞一般有一段潛伏期，潛伏期內(nèi)細(xì)胞不分裂，但可貼壁或游走。過了潛伏期細(xì)胞便進(jìn)入分裂期。細(xì)胞長滿平底之后要代傳培養(yǎng)。

四、凍存及復(fù)蘇

一般采用-196℃的液氮凍存，凍存管中加入含有保護(hù)劑的培養(yǎng)基。復(fù)蘇即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃的水中迅速融解，然后將人脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞，HAMECC細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。