著色霉PCR檢測(cè)試劑盒

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法

1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。

5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

定量PCR方法：

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PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度

Phospho-SMC1(Ser957)

： 0酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)1抗體 0.1ml

ESM1： 內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1抗體 0.1ml

波形蛋白抗體 Anti-Vimentin 0.1ml

Anti-TSARG7/FITC 熒光素標(biāo)記發(fā)生相關(guān)的新基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-IKK gamma(Ser43) 0酸化KB抑制蛋白γ抗體 規(guī)格 0.1ml

TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3) 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)ELISA試劑盒 ，英文名： αZGP1 ELISA Kit

兔子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit 96T/48T

牛轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒 Bovine ansforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA Kit

英文名稱(chēng)HumanFIIELISAKit人II(FII)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

蛋白巰基化(S-thiolation)同位素法分析試劑盒20次

Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISA試劑盒大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
著色霉PCR檢測(cè)試劑盒phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide 0酸化氨基末端1/2/3(pJNK1/2/3)抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-AF6/Afadin 絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Caspase-9 (Tyr153) 0酸化半胱9抗體 規(guī)格 0.1ml

大鼠血清封閉液 10ml Gibco原料,2%血清

VDCC-L alpha 英文名稱(chēng)： L-型電壓依賴(lài)型鈣通道α抗體 0.1ml

DNA Polymerase gamma 英文名稱(chēng)： DNA聚合酶γ/DNA pol γ抗體 0.2ml

Anti-AF6/Afadin 絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。

3.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

5.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8.如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。