僅供科研實驗產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 性狀 | 來源 |
唾液酸酶2(SIAL2)重組蛋白 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | 凍干粉 | 原核表達 |
英文名稱:Recombinant Sialidase 2, Cytosolic (SIAL2)
MEU2; N-Acetyl-Alpha-Neuraminidase 2; Cytosolic sialidase
酶與激酶
物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
來源:原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::n/a
預(yù)測分子量:25.1kDa
實際分子量:25kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:His185~Gln379 with
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點:-
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
標簽選擇:
親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達載體的構(gòu)建
c. 無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細胞瞬時轉(zhuǎn)染
e. 表達小試,條件優(yōu)化
f. 表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測
誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。
注意事項:
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。
2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復(fù),然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
相關(guān)產(chǎn)品:
ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor 0.5mgChRM1(muscarinic acetylcholine receptor) 毒蕈堿型乙酰受體M1抗原
ACLY Protein Human 重組人 ACLY / acly / ATP citrate lyase 蛋白 (His 標簽)
BMPR1A重組小鼠 ALK-3 / BMPR1A 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD8
操作步驟 :
根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
犬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Babesia canisPCR 50T
人副流感病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Human Parainfluenza Virus(HPIV)RTPCR 50T
日本腦炎病毒乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Japanese Encephalitis Virus(JEV)()RTPCR
塞姆利基森林病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Semliki Forest Virus(SFV)RTPCR
NT-4 大鼠神經(jīng)營養(yǎng)素-4Multi-class antibodies規(guī)格:
Anti-Phospho-ELk1 (Ser383) 0酸化細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MYBPC3 心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
PLGA(Human plasminogen activator) ELISA Kit 人纖溶酶原激活劑 96T
ST2 英文名稱: 白細胞介素1受體相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
CNTD 英文名稱: 細胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
Anti-Phospho-ELk1 (Ser383) 0酸化細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
唾液酸酶2(SIAL2)重組蛋白瘧原蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Plasmodium spp.PCR
駑巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Babesia caballiPCR
膿腫分枝桿菌 英文名稱; Mycobacterium abscessus complex
牛支原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycoplasma bovisPCR