詳細(xì)介紹
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix(2mM)
4 μl引物1(10pM)2 μl
引物2(10pM)2 μl Taq
酶 (2U/μl)1 μl DNA
模板(50ng-1μg/μl)1 μl
加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):肉芽腫鞘桿菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Calymmatobacterium granulomatisPCR
規(guī)格:50T
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
相關(guān)產(chǎn)品:
人Dectin-1基因PCR檢測(cè)試劑盒
人E-選擇素G98T基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒(PCR-RLFP)
人E-選擇素S128R基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒(PCR-RLFP)
人FGFR3 1138G/A多態(tài)性檢測(cè)試劑盒(PCR-RLFP)
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2 .對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)3 .10×PCR Buffer4 .2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM5 .Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl Taq 酶(2U/μl) 1μlDNA 模板(50ng-1μg/μl)???1 μl |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
IgG/Bio 標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml
phospho-FLNC (2233): 0酸化細(xì)絲蛋白2抗體 0.1ml
G蛋白/鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白抗體 Anti-G Protein 0.1ml
Anti-Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化p21激活1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-SRF (Ser77) 0酸化生長(zhǎng)激素釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子) 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-rat IgG 羊抗大鼠IgG (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)ELISA試劑盒 ,英文名: HBeAb ELISA Kit
小鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousemyeloperoxidase,MPOELISAKit 96T/48T
人膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒 Human GDNF ELISA KIT
RatAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit大鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白H3-K4甲基化免疫共沉淀分析試劑盒5次
Mouseai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISA試劑盒小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
肉芽腫鞘桿菌PCR檢測(cè)試劑盒GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
IGF1R IGF1R / CD221 兔單抗 (PE) Human
Rhesus antibody Rh phospho-Cyclin E(Thr395) 0酸化周期素E抗體 規(guī)格 0.1ml
品名 規(guī)格 備注
ZWINT 英文名稱(chēng): 著絲粒ZW10相互作用蛋白1抗體 0.2ml
DRG1 英文名稱(chēng): GTP發(fā)育調(diào)控結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
IGF1R IGF1R / CD221 兔單抗 (PE) Human
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。